小鼠线粒体DNA缺失突变实时定量PCR检测和康欣口服液对其影响地.pdfVIP

小鼠线粒体DNA缺失突变的实时定量PCR检测及康欣口服液对其影响的研究 刖}罱 衰老和抗衰老是个十分古老的课题。两千多年前《黄帝内经》记载：“尽终其天年， 度百岁乃去”，表明人们对健康长寿的向往是伴随着人类文明活动而开始的。随着时代 发展，生活水平不断提高，人口渐趋老龄化。据统计，全世界60岁以上的老人约占人 口总数的10％以上。目前我国老年人口己超过1．3亿，据专家预测，到2015年我国60 岁以上人口将达2．8亿。人口老龄化势必造成整个社会结构发生改变，以致于形成新的 社会关系，同时也会给整个社会经济、政治、教育、家庭、医疗保健等带来一系列的新 问题。面对老年化的社会，改善老年人的生活质量、提高他们的健康水平、延缓衰老， 不仅可以极大地减轻社会和家庭的负担，而且有利于老年人为社会做出更多贡献。因此， 延缓衰老成为当今世界性的重大医学课题之一。 中医学对衰老的成因、机制以及如何抗衰老等方面都有自己独特的见解，已经提出 肾虚致衰老、脾虚致衰老、肝虚致衰老、心虚致衰老、肺虚致衰老以及气血失调致衰老、 阴阳失调致衰老等多种学术观点，其中的虚实夹杂多因素致老浼日益引起关注。我院杜 建、张小如等教授根据文献研究、实验室研究、流行病学和临床研究的结果，提出以肾 虚为主、脾虚为次，气血衰少兼夹瘀血的“本虚标实”致老学说。其共同研制的康欣口 服液(原名强力抗老液)就是遵循着此学说，立补肾健脾养血活血法来选方用药的。该方 从抗自由基损害、免疫调节、脂代谢调节、改善内分泌水平、调节神经生理学功能等方 面开展了系统的研究，显示了其良好的抗衰老作用…。 衰老是一种复杂的病理生理现象，衰老机理的研究已从整体水平、器官水平、 细 胞水平发展到分子水平。近年来大量的研究表明，衰老的发展过程与线粒体 线粒体作为细胞呼吸和氧化的中心，同时也是产生活性氧(reactireoxygenspecies， ROS)的重要场所。正常机体内ROS的产生与消除处于动态平衡状态，但随着机体年龄的 增加，这种平衡状态被打破，衰老机体清除氧自由基的能力下降，使得线粒体ROS和自 由基生成增加，导致体细胞mtDNA不断发生突变，由此引起线粒体膜结构以及功能损伤， 线粒体的损伤又不可避免地增强呼吸链的ROS和自由基生成，如此反复，以致形成恶性 循环，最终引发机体多种生理功能的紊乱，促进多种老年疾病的发生、发展，加速衰老 进程船3。目前对线粒体突变的研究也成为衰老机制研究的热点。 mtDNA突变随年龄的增长而增多，使mtDNA基因组的突变率常作为衰老过程的潜在 青年、老年三个年龄组的皮肤成纤维细胞中都检测到4977bp片段缺失，其中老年组最 突变累积的结果使线粒体氧化磷酸化的能力逐渐降低，细胞产生ATP的量越来越少，表 现出来的症状也越来越明显。 fluorescent 实时荧光定量PCR(real—time quantitativePCR，FQ-PCR)№1技术是 近年来发展起来的一项定量分析技术，在敏感性、快速性、准确性等方面比传统的PCR 3 福建中医药大学硕士学位论文 方法具有明显优势。我们采用荧光定量PCR的技术研究具有补肾健脾、养血活血作用的 术相结合，以期为运用补肾健脾养血活血法延缓衰老提供实验依据，为中医药防治衰老 拓展思路、为康欣口服液的进一步研发奠定前期工作基础。实验结果显示与老年空白对 照组比较，康欣口服液能显著降低老年Balb／c小鼠mtDNA的缺失突变，说明具有补肾 填精、健脾益气、养血活血功效的补。肾健脾养血活血方药一康欣口服液，可以抑制老年 小鼠mtDNA的缺失突变，从而延缓衰老。此结果在分子水平上，进一步揭示了补肾健脾 养血活血方药抗衰老作用可能的机理。 小鼠线粒体DNA缺失突变的实时定最PCR检测及康欣口服液对其影响的研究 材料与方法 一、实验材料 1．实验动物清洁级Balb／c小鼠，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，证书号 件为：室温22。C士2C，相对湿度在50—60％，小鼠喂饲颗粒标准饲料，并定期补充维生 素C。 2．药物康欣口服液(国药准字由枸杞、制首乌、淫羊藿、女贞子、当归、 菟丝子、黄芪、黄精等十三味中药所组成，由福建屏山制药有限公司生产。 3．引