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DNA修复复合体DNAPK——肿瘤放疗中药理学靶点 　 【关键词】 DNA修复； DNAPK抑制剂； 肿瘤； 放疗增敏 毕业论文 目前 在 研究 有关肿瘤细胞对放疗敏感性方面，DNA修复蛋白的抑制剂是一个热点。在修复DNA的蛋白中，DNA依赖的蛋白激酶(DNAPK)参与了多细胞生物的非同源末端连接（NHEJ）过程，能保护由于电离辐射所致双链DNA被破坏的细胞，所以它的特异性抑制剂作为放疗增敏剂倍受关注。本文就DNA损伤修复的机制及DNAPK抑制物的生物学特性进行阐述。 论文代写 1 概述 论文代写 为提高肿瘤患者的生存率，应不断选择毒副作用尽量小的综合 治疗 方法 。寻找能有效抑制DNA损伤修复的因子以运用到放疗增敏中，是目前研究的一热点。DNA损伤触发各种细胞应答，其中包括DNA的自我修复，途径有逆转，切除或再结合等，可以多种途径共同参与。研究表明，对放疗不敏感的肿瘤细胞，其DNA具有很强的修复活性。据此制药公司一直着手于对DNA修复抑制剂的开发。 但DNA修复抑制剂可引起不良反应。因DNA修复是正常细胞的生理现象，参与基因稳定性的维持，其活性被抑制可导致碱基错配修复或核苷剪切修复能力的下降，引发正常组织恶变，因此将DNA修复活性作为药 理学 靶点时必须仔细研究其修复机制及参与反应的关键蛋白，以助评估潜在副作用如细胞毒性或癌变，并设计特异性强的抑制剂。 论文代写 在各种DNA修复途经中，具有两个临床 应用 价值：(1) 由O6烷基鸟嘌呤甲基转移酶(AGT)所参与的O6烷基鸟嘌呤的逆转机制[1]；(2) 主要通过非同源末端连接（NHEJ）途经的双链损伤修复机制[2]。在哺乳动物细胞中NHEJ途径需要一些因子的参与，其中DNA依赖的蛋白激酶（DNAPK）是参与双链损伤修复的修复复合体的基本组成成分。本文主要讨论DNAPK作为一个药理学靶点的相关 内容 、其抑制剂的生物学特性以及增加细胞对放疗敏感性的 影响 。 2 NHEJ途径中的双链损伤修复复合体DNAPK 当DNA双链受到损伤时，细胞将通过不同的途经启动应答克服损伤进行修复。尽管同源性重组修复可恢复DNA链的连续性，但哺乳动物细胞中NHEJ途径在双链损伤修复过程中起主要作用。NHEJ主要依赖6个核心因子包括：Ku70、Ku80、DNAPKcs、XRCC4、连接酶IV和Artemis[3，4]。而DNAPK这个丝/苏氨酸激酶，正是包括催化亚单位DNAPKcs和调节亚单位Ku蛋白两部分的复合物，它通过激活后的构像改变[5]，产生生物学效应。DNAPKcs是由4127个氨基酸组成的相对分子质量约470000的大分子量蛋白质，其基因位于8q11。其C末端结构域和参与信号传导的磷脂酰肌醇激酶3(PI3K)有同源性，故属PIKK（PI3K样激酶）家族，其靠近激酶活性区的 30023850位氨基酸处是与ku蛋白相互作用的部位，细胞凋亡时DNAPKcs在肽链中间部位断裂而失活；Ku蛋白是一种自身抗原，由2条多肽链紧密结合在一起形成异二聚体结构，两条肽链分别称Ku70和Ku80。人Ku70基因位于22q13，编码609个氨基酸，相对分子质量约69000；Ku80基因位于2q3334，编码732个氨基酸，相对分子质量约83000。双链损伤(DSBs)修复时，2个Ku分子通过一个预先形成的通道特异性地连接到双链损伤处，分别识别并结合于每一条DNA链末端，然后以ATP依赖的方式沿DNA链分别向两端滑动一小段距离，同时Ku本身所具有的弱解旋酶活性使2个断端局部解链。从而形成KuDNA复合物吸引DNAPKcs到损伤部位[4]，与之结合并激活其丝/苏氨酸激酶活性，磷酸化参与修复及损伤信号传导的一系列蛋白质，如断端经核酸外切酶修剪、DNA聚合酶填充等，还需通过另一复合物即异二聚物XRCC4/连接酶IV的帮助[6]，其参与DNA断裂再接的过程；而蛋白Artemis则在发夹末端受损时起一定作用。综上可见,核心因子DNAPK联合其他因子共同参与了NHEJ过程。最终当DNA链一旦连接起来，DNAPK即发生自身磷酸化，使2个亚单位从DNA链上解离。另有研究发现，DNAPK在维持染色体末端端粒的稳定性及防止染色体端端融合等方面起作用。 论文代写 3 DNAPK的激酶活性 DNAPKcs具较弱蛋白激酶活性[7]，当DNAPKcs经由Ku/DNA 复合物介导催化后，激酶活性大大增强。虽在其他序列中丝/苏氨酸结构也可发生磷酸化，但一般发生在S/TQ结构。虽尚未发现DNAPK对翻译后的修饰起作用，但它可将体外的Ku和细胞内的XRCC4磷酸化，体外试验也已证实Artemis一旦被磷酸化则将改变其核酶活性。