依托昔布对大鼠单侧输尿管梗阻肾脏病变影响.docVIP

依托昔布对大鼠单侧输尿管梗阻肾脏病变影响 　【摘要】 　　目的：观察选择性环氧化酶2抑制剂依托昔布对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏病变的影响. 方法：将大鼠随机分为单侧输尿管梗阻组，依托昔布治疗组和对照组进行实验，测定血肌酐、尿素氮和肾皮质NO含量，并用免疫组化法半定量测定肾组织TGFβ1和COX2的表达水平. 结果：单侧输尿管结扎术后3 wk，单侧输尿管梗阻组和用药组大鼠肾脏均可见明显病理改变与纤维化，血肌酐［（38.10±3.93，27.80±2.57） mL/min］、尿素氮［（9.18±0.03，8.14±0.03） mmol/L］和肾皮质NO含量［（6.01±0.17，4.47±0.12） mmol/L］均比对照组［(22.30±2.28) mL/min, (6.53±0.02) mmol/L, （1.65±0.11） mmol/L］显著性升高，肾组织TGFβ1（2.41±0.19，1.38±0.13）和COX2（2.74±0.07，1.52±0.05）的表达水平显著性上调. 用药组与单侧输尿管梗阻组比较，病理改变与纤维化程度，血肌酐、尿素氮和肾皮质NO含量、肾组织TGFβ1和COX2的表达水平差异有统计学意义（Plt;0.05）. 结论：特异性COX2抑制剂依托昔布能减轻单侧输尿管梗阻大鼠肾脏病理损伤和纤维化改变. 【关键词】 输尿管梗阻 纤维化 环氧化酶2 依托昔布 0引言 环氧化酶(cyclooxygenase, COX)包括 COX1和COX2两种同工酶，目前认为是前列腺素代谢环节中的关键性限速酶，COX1参与正常生理过程，而COX2可介导病理改变［1］. 研究结果显示，COX2大量生成在输尿管梗阻所引发的肾小管间质纤维化过程中起重要作用［2］，并发现COX2在肾皮质的过度表达可能是肾内炎性细胞浸润和聚集的起始或促进因素之一. 而临床上用非甾体类抗炎药(nonsteroid antiinflammatory drugs, NSAIDs)治疗肾脏炎性疾病引起不良反应可能与NSAIDs在阻断COX2催化的病理性前列腺素合成的同时，也阻断了COX1催化的生理性前列腺素的合成有关. 为了探讨通过选择性地阻断COX2的合成，避免NSAIDs的不良反应的有效途径［3］，我们用单侧输尿管梗阻大鼠模型［4］，观察肾组织中COX2和TGFβ1的改变及其在输尿管梗阻所致肾损伤的发生发展中的作用，并观察选择性COX2抑制剂依托昔布(Etoricoxib)对梗阻性肾病发生发展的影响及对肾脏的保护作用，为治疗相关肾脏损伤提供基础. 1材料和方法 1.1材料健康雄性SD大鼠30只，体质量180~220 g，中国医学科学院实验动物中心提供，饲养环境保持通风，湿度55%，温度22℃，昼夜灯光照明，定期消毒笼具. 依托昔布由北京欣经科生物技术有限公司提供. 山羊抗大鼠COX2多克隆抗体、兔抗大鼠TGFβ1多克隆抗体为Santa Crutz公司产品. 1.2方法 1.2.1单侧输尿管梗阻模型动物平均分为对照组、单侧输尿管梗阻组和依托昔布治疗组. 对照组除不结扎和剪断输尿管外，其余步骤同其它两组. 治疗组于术前24 h开始给予依托昔布，每日10 mg/kg溶于1 mL生理盐水中灌胃，梗阻组仅以等量生理盐水灌胃. 0.1 g/L水合氯醛350 mg/kg腹腔注射麻醉梗阻组和依托昔布治疗组大鼠. 于背部左侧纵形切开皮肤，钝性分离肌肉，暴露左侧肾脏，分离输尿管，分别在紧贴肾门处及远端结扎输尿管，于两结扎处之间剪断，逐层缝合肌肉、皮肤，以碘伏消毒. 术后肌肉注射罗氏芬预防感染，每日1.5 mg/kg，连续3 d. 肾脏取材与保存：术后第3周，在采集血液标本后，手术取出大鼠左肾，剥离肾包膜，将肾脏沿纵轴剖开，取适量皮质组织作NO含量测定用，其余组织迅速保存在中性甲醛中以备组织学染色和免疫组织化学染色用. 1.2.2血液生化指标测定将术后第3周采集血液标本离心，取血清，在全自动生化分析仪上测定血肌酐与尿素氮. 1.2.3肾皮质NO含量测定取约0.5 g左肾组织，加入4 mL 4℃生理盐水中，用玻璃匀浆器在冰水浴中研磨制成匀浆，4℃，1000 r/min，离心5 min，取上清液-20℃保存待测. 用硝酸还原酶法测定NO含量，按试剂盒检测步骤，分别在空白管，标准管，测定管中滴加试剂，混匀，37℃水浴60 min，再次滴加试剂，充分旋涡混匀30 s，室温静置10 min, 4000 r/min离心10 min，取上清，分别加入显色剂，混匀，室温静置10 min，蒸馏水调零，550 nm, 0.5 cm光径比色测定各管吸光度值，NO含量（μmol/L)=［(样品管吸光度-空白管吸光度)或(标准管吸光度-空白