水溶性CdSe-CdS核壳纳米晶及牛血清白蛋白相互作用.docVIP

水溶性CdSe/CdS核壳纳米晶及牛血清白蛋白相互作用 　 作者：林成芳， 黄风华， 蓝亚玲， 程陈， 王锐环 【摘要】 目的探讨以半胱氨酸（Cys）表面修饰的CdSe/CdS核壳纳米晶（CdSe/CdS/Cys）在标记牛血清白蛋白中的应用。方法用紫外及荧光光谱法研究CdSe/CdS/Cys纳米晶与牛血清白蛋白的相互作用。结果标记牛血清白蛋白后CdSe/CdS/Cys纳米晶的荧光发射峰强度明显增强。结论新型CdSe/CdS/Cys纳米晶可用于标记牛血清白蛋白，标记牛血清白蛋白的CdSe/CdS/Cys的吸收及发射光谱变化可能是由于二者之间存在配位以及静电相互作用。 【关键词】 纳米结构； 生物学标记； 牛血清白蛋白； 光谱分析 由于半导体纳米晶具有量子尺寸效应和表面效应，因而展现出独特的物理和化学特性，具有优良的光谱特征和光化学稳定性，其作为荧光生物探针，在生物医学方面的潜在应用价值引起科学工作者的极大关注[15]。1998年，Alivisators等首次报道了将半导体纳米晶作为荧光探针对鼠组织细胞进行标记[1]，纳米晶在生物科学中的应用很快就引起人们的兴趣。但由于早期的纳米晶是在有机相中制得，因此不溶于水、不适于生物应用，这种方法制得的纳米晶需通过改性转移到水相中，而改性往往使得纳米晶发光量子产率降低[4]。在水相中直接合成具有高荧光量子产率、发光稳定的水溶性核壳式纳米晶是目前研究的热点[68]。唐爱伟等已合成了巯基乙酸为稳定剂的CdSe/CdS核壳纳米晶[6]，因巯基乙酸具有毒性，故本课题组以无毒性的半胱氨酸（Cys）为表面修饰剂及稳定剂，在水相中合成了CdSe/CdS/Cys核壳纳米晶（合成表征部分另文发表），该纳米晶具有高的发光量子产率和光化学稳定性，并且表面修饰剂含有COOH及NH2两种基团，故CdSe/CdS/Cys核壳纳米晶具良好的水溶性及生物相容性。在前期工作的基础上，笔者用紫外及荧光光谱研究该新型水溶性CdSe/CdS/Cys核壳纳米晶与牛血清白蛋白的相互作用，为其在生物医学研究方面的进一步应用奠定基础。 1材料与方法 1.1仪器Cary 50紫外可见吸收光谱仪（美国瓦里安公司）；RF540型荧光分光光度计（日本岛津公司）；PHS3C精密pH计（上海雷磁仪器厂）。 1.2试剂3（羟甲基）氨基甲烷（简称Tris碱，BR级，上海国药集团）、牛血清白蛋白（BSA，相对分子质量67 000，BR级，上海伯奥生物科技有限公司），水溶性CdSe/CdS/Cys核壳纳米晶由本实验室合成并提纯，实验用水为二次蒸馏水。 1.3水溶性CdSe/CdS/Cys纳米晶与牛血清白蛋白作用准确称取BSA 670 mg溶解于二次水，并定容至100 mL，放置于4 ℃冰箱保存，作为储备液。往10 mL容量瓶中加入一定量的纳米晶溶胶及一定体积的1×104 mol/LBSA溶液，用TrisHCl缓冲液（pH 7.4）稀释至10 mL，静置1 h，扫描荧光光谱（λex＝420 nm）及紫外吸收光谱。 2结果 2.1水溶性CdSe/CdS/Cys纳米溶液及牛血清白蛋白的荧光光谱水溶性CdSe/CdS/Cys纳米溶液的激发和发射光谱见图1A，该纳米粒子发射峰位于567 nm，是一强的荧光发射峰（λex＝420 nm）。牛血清白蛋白的发射峰位于345 nm与666 nm处（图1B，λex＝275 nm）。牛血清白蛋白的荧光与水溶性CdSe/CdS/Cys纳米晶的在测定过程中互不干扰。 2.2CdSe/CdS/Cys核壳纳米晶与牛血清白蛋白作用的光谱分析 2.2.1CdSe/CdS/Cys核壳纳米晶与牛血清白蛋白作用的紫外吸收分析CdSe/CdS/Cys核壳纳米晶浓度一定，不断增加BSA的浓度所得吸收光谱见图2。随着BSA的浓度从0增加到4×105 mol/L，纳米晶的吸光度逐渐减弱，在457 nm处出现一等吸收点。 2.2.2CdSe/CdS/Cys核壳纳米晶与牛血清白蛋白作用的荧光分析25 ℃下CdSe/CdS/ Cys核壳纳米晶与CdSe/CdS/CysBSA在不同pH的TrisHCl缓冲液体系中的荧光图谱见图3。a,b，c,d, e曲线为CdSe/CdS/Cys核壳纳米晶在pH为5，6，7.4，8，9下的荧光曲线，而f,g,h,i,j分别为CdSe/CdS/CysBSA在pH为5，6，7.4，8，9下的荧光曲线。用公式 ΔF＝FCdSe/CdS/Cys-BSAFCdSe/CdS/Cys （式中F为荧光强度值） 求出各pH下的两种溶液体系的荧光强度差值ΔF，再用ΔF对pH作图，可得图4。由图4可以看出，随着pH的增大，ΔF逐渐增大，当pH为7.4时，ΔF最大，也即敏化程度最大，继续增大pH，则