载脂蛋白A1对胆固醇逆转运及ABCA1表达影响.pdfVIP

载脂蛋白A1对胆固醇逆转运及ABCAl表达的影响 胆固醇在巨噬细胞源泡沫细胞聚积是形成动脉粥样硬化的重要事件之一，在动脉粥 样硬化的早期阶段，循环中的单核细胞粘附到损伤的血管内皮细胞，继而在局部产生的 趋化分子的作用下侵入到内皮下，进一步分化为巨噬细胞，经吞噬氧化低密度脂蛋白(Ox —DL)使细胞内大量脂质沉积，从而形成巨噬细胞源性泡沫细胞…。促使巨噬细胞源性 泡沫细胞中胆固醇流出对防止动脉粥样硬化的发生和发展具有重要意义旧1，是近年动脉 粥样硬化防治的国际研究热点之一。 大量研究证实血浆高密度脂蛋白(high—density 化作用，其最主要机制在于参与胆固醇的逆向转运(reverse 醇逆转运中起关键作用∞．4】，由此印oAl能否促进胆固醇逆转运及其可能途径，也成为众 多学者研究的焦点。有研究认为印oAl通过促进泡沫细胞RcT过程和HDL抗炎症作用 来发挥抗AS的功能”J。在多个动物实验中发现印oAl能明显抑制甚至逆转AS的进 程∞J。在人类，印oAl发生第173位的半胱氨酸取代精氨酸的点突变后，产生了一个名 为”apoAl 并渗人粥样斑块内，引起明显的剂量依赖性斑块消退¨1。 代谢、运送胆固醇至肝脏等类固醇合成组织、分泌胆汁胆固醇、防止AS进展等作用o 逆转运的HDL受体，其在HDL的生成代谢和胆固醇逆转运中的起关键作用。直到1999 bind— 年通过对Tan西er病基因研究才对胆固醇逆转运及三磷酸腺苷结合盒转运A1(A1m c船sette ing tmnsponer 固醇外流的关键限速基因，其基因突变可导致细胞内胆固醇外流障碍，细胞胆固醇严重 沉积，导致AS的发生【l0|。2001年，Attie等¨u对Tan舀erDiease(’rD)杂合子的研究证明 升高40％，且低水平的HDL与胆固醇流出减慢相关，说明HDL水平与胆固醇流出直接 囱鐾直堡堂医亟±婴壅生堂焦迨塞(兰塑璺生2 等u纠证实ABCAl在维持血浆HDL水平和促进胆固醇从动脉壁的流出中具有重要作用， 我国学者朱颖，严晓伟¨40通过对糖尿病地鼠泡沫细胞内胆固醇外流的研究同样证实AB— 成和促进泡沫细胞胆固醇流出有极其重要意义，研究证实ABcAl表达在转录水平和转 录后水平均受到高度调控，环磷酸腺苷(cAMP)、胆固醇负荷、反式维甲酸、过氧化物酶体 activated 增殖物激活型受体(pero)【isomeprolix—ferator 过与ABcAl相互作用来影响泡沫细胞胆固醇的逆转运的可能性。因此，本研究以THP 醇逆转运和ABCAl表达的影响，以探讨apoAl在As发生发展中的作用。 第一部分THP—l巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立 1．材料与方法 1．1实验材料 1．1．1实验器材 细胞培养箱 Igma公司 超净工作台 上海上净净化设备公司 倒置相差显微镜 Nikon公司 一70℃冰箱 REVCO 一20℃冰箱 QINDAO—LIEBHERR 4℃冰箱 BRIGH7rSTAR 恒温水浴锅 北京长风仪器公司 计算机图像分析系统 德国LeicaQ埘n软件 台式离心机 Eppendorf公司 移液枪 Eppendorf公司 双目光学显微镜 kica公司 一次性吸管 上海苏海公司 1．1．2实验药品及试剂 RPMI—1640 Gibco公司 PBS Gibco公司 豳鐾直匿堂医亟±婴塞生堂焦迨塞(兰塑墨堡2 青霉素G钾 华北制药厂 链霉素