HPLC法测定肾炎四味胶囊中黄芩苷含量.docVIP

HPLC法测定肾炎四味胶囊中黄芩苷含量 　【摘要】; 目的 探讨肾炎四味胶囊中黄芩的主要有效成分黄芩苷含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法：色谱柱：Kromasil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇－水－磷酸溶液（47∶53∶0.2）；流速：1.0 mL/min；检测波长：280 nm；柱温：35 ℃。结果 黄芩苷在进样量为0.199 2～0.996 0 μg范围内线性关系良好，r=0.999 5；黄芩苷的回收率为98.40%，RSD为1.78%；3批肾炎四味胶囊平均含黄芩苷25.4 mg/粒，RSD＝0.99％。结论 该方法灵敏度高，重复性好，可作为肾炎四味胶囊中黄芩苷的含量测定方法。 【关键词】; 肾炎四味胶囊；黄芩苷；HPLC法；含量测定 ; 1 实验材料 ; 1.1; 仪器 ; 高效液相色谱仪（岛津LC－10ATvp，日本岛津公司）；N-3000色谱工作站。 ; 1.2; 试药 ; 甲醇为色谱纯试剂，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯；黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号0715-200211）；肾炎四味胶囊（湖北午时药业股份公司，批20060406。 ; 2 方法与结果 ; 2.1; 色谱条件 ; 色谱柱：Kromasil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇－水－磷酸溶液（47∶53∶0.2）；检测波长：280 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃。 ; 2.2; 供试品溶液的制备 ; 取本品装量差异项下的内容物，混匀，取约0.1 g，精密称定，加70%乙醇100 mL，称定质量，超声（功率80 W、40 kHz）处理30 min，放冷，加70%乙醇补足减失的质量，摇匀，用0.45 μm的膜滤过即得。 ; 2.3; 空白溶液的制备 ; 取除黄芩外的其余处方量饮片，按制备工艺方法制备缺黄芩的空白样品，按上述供试品溶液制备方法制成缺黄芩的空白溶液。 ; 2.4; 对照品溶液的制备 ; 精密称取黄芩苷对照品9.96 mg，置100 mL量瓶中，加70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1 mL中含黄芩苷49.8 μg）。 ; 2.5; 空白干扰试验 ; 分别精密吸取对照品溶液、空白溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定,得色谱图（见图1）。结果表明，在与黄芩苷对照品色谱峰相同位置上无峰出现，说明缺黄芩空白对照对测定无干扰。 ; 2.6; 线性关系考察 ; 精密吸取浓度为99.6 μg/mL的黄芩苷对照品溶液2、4、6、8、10 mL，分别置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取10 μL进样，测定其峰面积积分值，结果见表1。 ; 以浓度(μg)对峰面积积分值进行线性回归，其回归方程为： ; Ａ＝1.995×106Ｃ－6 540，r＝0.999 5。 ; 结果表明黄芩苷在0.199 2～0.996 0 μg范围内具有良好的线性关系。 ; 2.7; 精密度试验 ; 精密吸取同一份供试品溶液10 μL，重复进样5次，测定黄芩苷峰面积积分值，分别为1 045 128、1 052 125、1 046 985、1 056 248、1 049 652，RSD为0.42%。结果表明：该仪器精密度良好。 　 ; 2.8; 稳定性试验 ; 分别精密吸取同一份供试品溶液10 μL，于0、3、6、9、12 h进样，测定其峰面积积分值，分别为1 056 325、1 052 125、1 048 628、1 050 325、1 061 254，RSD为0.48%。结果表明，供试品溶液在12 h内基本稳定。 ; 2.9; 重复性试验 ; 取同一批号样品（批5份，按上述条件依法平行处理并测定黄芩苷含量，分别为25.10、25.16、25.42、25.16、24.47 mg/粒，RSD为1.41%。结果表明本法重复性好。 ; 2.10; 回收率试验 ; 精密称取已知含量为49.91 mg/g（批样品0.05 g，共5份，分别精密加入黄芩苷对照品溶液（0.261 mg/mL）10 mL，再按“2.2”项下方法制备供试液，精密吸取10 μL注入液相色谱仪，测定黄芩苷含量，结果表明，本法加样回收率好。结果见表2。 ; 2.11; 成品及饮片含量测定; 按上述含量测定方法测定3批（批号分别为20060406样品中黄芩苷的含量，含量为25.1、25.4、25.6 mg/粒，n=3；平均25.4 mg/粒，RSD＝0