流式细胞术CD45-SSC设门在急性白血病免疫分型中应用.docVIP

流式细胞术CD45/SSC设门在急性白血病免疫分型中应用 　 作者：张玮，程小丽，杨玉琮，陈葳，王翔，周萍，尤元义 【摘要】 目的 探讨流式细胞术CD45/SSC设门在急性白血病免疫分型中的应用。方法 选用三色荧光抗体直接标记初诊急性白血病患者骨髓，应用流式细胞术CD45/SSC设门进行免疫分型。结果 49例急性白血病患者分为三型，其中系列专一型25例，占51.2%；系列非专一型21例，占42.8%；裸型3例，占6.0%。结论 流式细胞术CD45/SSC设门，容易将原始/幼稚细胞与正常成熟细胞群区分开，使白血病分型结果更准确、可靠。 【关键词】 流式细胞术；CD45；急性白血病；免疫分型 　　Application of CD45/SSC gating in acute leukemia immunophenotyping 　　ABSTRACT: Objective To investigate the application of CD45/SSC gating in acute leukemia immunophenotype. Methods Threecolor monoclonal antibodies were used to mark the marrows of acute leukemia patients, and CD45/SSC gating in flow cytometry was used for immunofluorescence. Results The 49 cases of acute leukemia immunophenotype were classified into 3 subgroups: lineage specific antigen expression (25 cases), aberration antigen expression (21 cases), and null type (3 cases). The percentage of each subgroup was 51.2%, 42.8% and 6.0%, respectively. Conclusion CD45/SSC gating technique can easily discriminate mature leukemia cells from normal cells, thus rendering more reliable and precise immunophenotype results. 　　KEY WORDS: flow cytometry; CD45; acute leukemia; immunophenotype 　　应用流式细胞术CD45/SSC设门进行急性白血病免疫分型已成为诊断急性白血病免疫分型的重要工具。传统的FSC/SSC设门分析最大缺点是不能将原始/幼稚细胞与正常成熟细胞群完全分开。现今国际上多采用CD45/SSC设门，利用造血系统细胞CD45表达量与细胞分化程度的高度相关性，很容易将原始/幼稚细胞与正常成熟细胞群完全分开，大大增加了白血病免疫分型的准确性。我院从2001年开始使用该方法，现将近几年内来自本院和外院的初诊49例急性白血病患者的免疫分型结果总结报告如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 病例选择 按照文献[1]的标准，49例来自本院和外院初诊的急性白血病患者经会诊而确诊。其中男30例，女19例，年龄1-80岁。 　　1.2 仪器和试剂 仪器为美国BeckmanCoulter公司EPICE ELITE型流式细胞仪，氩离子激光光源，功率15W，激发波长488nm，发射波长525nm。选用三色直接标记的荧光抗体，抗体组合根据阴性对照不同分为两种，以IgG1FITC/IgG1PE/CY5CD45为阴性对照的抗体组合：CD10FITC/CD13PE/CY5CD45、CD38FITC/CD33PE/CY5CD45、CD34FITC/CD19PE/CY5CD45、HLADRFITC/CY5CD45；以IgG2aFITC/IgG2aPE/CY5CD45为阴性对照的抗体组合：CD20FITC/ CD7PE/ CY5CD45、CD2FITC/CD14PE/CY5CD45。上述抗体均购自Immunotech公司。 　　1.3 方法 采用单克隆抗体三色荧光直接标记法。取肝素抗凝骨髓2-3mL，常规溶血，将细胞数调整后溶于PBS中，每管加此样品100μL(约含1×106/mL)，加入荧光抗体20μL，混匀后置室温暗处20min，PBS洗涤，甲醛PBS固定后上机检测。 　　1.4 流式细胞仪检测 每次检测样本前用Flo