农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化体系的建立与优化.PDFVIP

维普资讯 2004年 lO月 甘 肃 农 业 大 学 学 报 第 39卷 第5期516~519 JOURNALOFGANSUAGRICULTURALUNIVERSITY 双 月 刊 农杆菌介导的紫花苜蓿遗传 转化体系的建立与优化 陈 晨 。， 曹致中1， 贺顺姬2， 乔代蓉2 曹 毅 。 (1．甘肃农业大学草业学院，甘肃 兰州 730070；2．四川大学生命学院，四川 成都 610065) 摘要：以 “中苜一号”紫花苜蓿品种作为受体材料，建立了适用于农杆菌介导的转基因组培体系，并对GUS基 因进行转化，经 GUS组织化学染色，以获得抗性愈伤组织分析为 目的，转化优化条件为：叶片预培养 4～5d，用农 杆菌菌液 (A60o=O．3--0．8)侵染20min，然后在培养基上铺一层灭菌滤纸共培养 7d后清洗。 关键词：紫花苜蓿；遗传转化；根癌农杆菌；GUS基因 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1003．4315(2004)05．0516-04 EstablishmentandoptimizationofAgrobacterium—mediated transformationofalfalfa(MedicagosativaL．) CHENChen，CAOZhi—zhong，HEShun~i，QIAODai—rong，CAOYi (1．CollegeofPrataculturalScience，GansuAgriculturalUniversity,Gansu，Lanzhou730070； 2．CollegeofBiology,SichuanUniversity,Sichuan，Chendu610065，China) Abstract：TtliSpaperestablishedtheregeneration system ofsomaticembryogenesisforthecultivaralfalfa “ZhongmuN0．1”genetic~ansformation．Manipulationsystem wasoptimizedbyKm—resistantcalliassaysandthe histologicaldetectionofGUSactivity．whichGUSgenecomedfrom plnatexpressionvectorpCAMBIA2301G The condition ofoptimization waspre—culture ofr4～5 days．infection with Agrobacterium tumefaciens (A601)= ．3-0．8)ofr20minnadwashedafter7daysofculture． Keywords：Alfalfa；genetictrnasformation；Agrobacteriumtumefaciens；GUSgene 紫花苜蓿(MedicagosativaL．)是世界上种植面积最大 ，应用最广泛的多年生豆科牧草 ，种植面积约3500 万hm2…。苜蓿营养丰富，是多种家畜喜食的优质饲草饲料，素有 “牧草之王”的美称。随着分子生物学的 快速发展，借助植物基因工程手段改良苜蓿性状已成为现代育种的重要途径。其中，最常用的转基因方法 是建立在植物组培基础上的农杆菌介导法 2【】。由于苜蓿生长周期长、该属种类繁多、基因组大、组培中生根 率低等原因，人们一直未能建立一个较普遍适用重复性强的苜蓿再生模式体系。本文通过建立 “中苜一号” 耐盐苜蓿的转基因试验体系，为今后导人耐盐相关基因，提高苜蓿耐盐性提供了相关的技术指标。 1 材料与方法 1．1 试验材料 ’ 供试品种为紫花苜蓿 “中苜一号”(MedicagosativaL．“ZhongmuNo．1”o种子经 HgC12消毒处理后获 作者简介：陈 晨 (1980-)，女，