根癌农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化体系的建立与优化.PDFVIP

维普资讯 第 29卷 第 2期 中 国 草 地 学 报 2007年 3月 VoI．29 No．2 ChineseJournalofGrassland M ar．2007 文章编号 ：1673—5021(2007)02—0102—05 根癌农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化体系的建立与优化 刘小琳 ，王继峰 ，胡晓艳 ，刘艳 昆 ，熊军波 ，康俊梅 ，杨青川 (I．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100094；2．西北农林科技大学资源环境学院，陕西 杨凌 712100) 摘要：以“中苜 1号”紫花苜蓿 7日龄无菌苗子叶和再生无菌苗的叶片为材料，建立了适用于农杆菌介导的转基 因组织培养体系，并对MsNHX1基因进行转化。转化优化条件为：“中苜 1号”紫花苜蓿 7日龄无菌苗子叶、再生无 菌苗叶片，用农杆菌菌液 (A0。一0．6)侵染 6min，然后在培养基上铺一层灭菌滤纸培养 7d后清洗，建立了苜蓿快速有 效的遗传转化体系。 关键词：紫花苜蓿；遗传转化；根癌农杆菌；MsNHX1基因 中图分类号：$541 文献标识码 ：A 紫花苜蓿 (MedicagosativaL．)作为重要 的 分别接种到卡那霉素 (Kni)含 0mg／L、25mg／L、 多年生优质豆科牧草 ，在世界范 围内广泛种植 。 50mg／L、75mg／I100mg／L、200mg／L的UM培养 紫花苜蓿还可 以将大量根系遗 留在土壤里，在改 基上 20d后观察长势 。 良土壤结构 、理化性质 、保持水土和保护环境等 方面具有重要作用[1]。随着分子生物学 的快速 表 I 实验用不同分化方案 发展，借助植物基因工程手段改 良苜蓿性状已成 Table1 Differentdifferentiationprotocolin experiment 为现代育种的重要途径 。其 中，最常用的转基 因 方法是建立在植物组培基础上 的农杆菌介导法 。 但 由于苜蓿生长周期长 、该属种类繁多、基 因组 大、组培 中生根率低等原因，人们一直未能建立 一 个重复性强 的苜蓿再生转化体 系。本文通过 建立 “中苜 1号”耐盐苜蓿 的转基 因试验体系 ，为 今后导入其他基 因、提高苜蓿性状提供 了相关 的 技术指标 。 1 材料与方法 1．1 试验材料 1．1．1 植物材料 供试品种为紫花苜蓿耐盐 品种 “中苜 1号” (MedicagosativaL．ZhongmuNo．1)，由中国农业 科学院畜牧研究所牧草研究室提供。 无菌苗 7日龄的子叶以及再生无菌苗的叶片作 1．2．2 头孢霉素 (Cef)浓度的确定 为遗传转化的受体 。 将 A 为 0．6左右的农杆菌菌液划线培养于含 1．1．2 培养基 本实验在参照紫花苜蓿高频再生组织培养体系 *通讯作者 的基础上 ，设计了 12种不同激素配比的诱导分化培 收稿 日期：2006一i0—26；修 回日期：2006—12—2l 基金项目：“十五”国家高技术发展计划(863计划)(2002AA241101)，国 养基 (表 1)。 家 自然科学基金项 目“紫花苜蓿盐胁迫特异表达基因的筛选与克隆” 1．2 试验方法 (3047ll10) 1．2．1 卡那霉素 (Kni)选择压的确定 作者简介 ：刘小琳(1982一)，女，内蒙古赤峰市人 ，在读硕士研究 选取 7日龄的无菌苗子叶和再生无菌苗 的叶片 生 ，主要从事牧草生物技术研 究 ． ～ 】O2 一 维普资讯 刘小琳 王继峰 胡晓艳 刘艳昆 熊军波 康俊梅 杨青川