柏树内生真菌发酵活性产物的分离.docVIP

植物内生真菌HDF-I-008发酵活性产物的分离 xx，xx （xx大学生命科学学院2004级生物制药） 摘 要：本试验尝试用大孔吸附树脂对该活性物质进行富集和分离，以得到一定纯度的活性物质，确定出较为合理的分离纯化工艺路线和条件。通过分离纯化实验，筛选出适合吸附植物内生真菌HDF-I-008所产活性物质的大孔吸附树脂X-5。不同浓度的乙醇溶液的洗脱实验表明，50%的乙醇溶液可以有效地将活性物质从树脂柱上洗脱，但对其组成及结构尚需进一步研究。 关键字：内生真菌；大孔吸附树脂；分离纯化 Isolation of active production from endophytic fungi HDF-I-008 xx，xx (xxx Unversity, institute of life sciences, biological pharmaceutics in 2004) Abstract: This experiment tries to employ macroporous adsorbent resin for enrichment and separation of the active substances, in order to get a certain purity substances and identify more reasonable routes and conditions of separation and purification. The research of purification of the endophytic fungus HDF-I-008 active substance appeared that resin X-5 is the best adsorbent. The different density of ethanol solution elution experiments show that 50% ethanol solution may elute effectively active substances from the X-5 resin column. However, we need further study its compositions and structures. Key words: endophytic fungi; macroporous adsorbent resin; isolation and purification 内生真菌(endophytic fungi)是指生活在植物体内或在其生活史的一定阶段处于植物体内的一类真菌[1]。近年来研究表明，内生真菌通常会产生与其宿主植物相同或相似的生理活性物质，在宿主的生长发育和系统演化过程中起重要的作用。真菌产生的生物活性物质存在极大的多样性(如抗肿瘤、抗病毒、抗细菌、抗真菌、抗虫等物质)，而利用植物内生真菌来研究开发生物农药，是解决化学农药问题的有效途径之一。植物内生真菌能够产生功能特殊的次生代谢产物，是新化合物新药物的潜在资源，它们在医药、工业、农业等领域具有重要的应用前景。 目前，用大孔树脂提取水溶性活性产物的方法多有报道[2]，其现己广泛应用于天然植物中活性成分的提取分离。由于大孔吸附树脂对吸附具有选择性，因此吸附现象在科学技术与工业生产的许多方面具有重要的应用价值。例如，通过选择性吸附，可以实现复杂物质体系的分离与各种成分的纯化:通过专一性吸附可以实现对复杂体系中某种物质的检测；目前，我国吸附分离功能高分子材料的研究、生产、应用己形成一个较好的体系，新的品种不断出现，应用领域不断扩展[3]。大孔树脂对生物化学制品的吸附分离都有良好的效果。在处理工业废水方面也有成功的应用。 现今对植物内生菌活性物质的分离技术主要有：溶剂萃取法，膜分离技术，盐析沉淀法和离子交换法。本实验尝试用大孔吸附树脂对植物内生菌的代谢活性物质进行富集和分离，以便确定出较为合理的分离纯化工艺路线和条件。 1 材料 1.1供试菌种 菌株HDF-I-008：由柏树中分离得到的一株具有抑菌活性的内生真菌。 指示菌株:HDB-Ⅱ-003， HDB-Ⅱ-005 （为白蚁肠道内具有分解纤维素能力的内生细菌，由黑龙江大学生命科学学院分离并保存） 1.2培养基 查氏培养基：蔗糖30g，NaN03 2.0g，KCl O.5g，MgS04 O.5g，FeS04 O.O1g，K2HP04 1.0g，蒸馏水1000ml，pH自然，固体培养基加入2％的琼脂。 牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，氯化钠5.0g，蒸馏水1000ml，pH7.0-7.2，固体培养基加入2％的琼脂，半固体培养基加入0.6％的琼脂