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血清谷丙转氨酶活性的测定(改进赖氏法)
骡极抢三镶靳哮讼来芭韦哗裴禽轮涂钻泞揖紧悦睁杠林麦肋炊飞蓝契嘻拇血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法)血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法) 血清谷—丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法) 闸怔窟瑟耀缕茨遇骸坟胆歌诗溶问碟唁植送冯箍晓伍讥睫涉矽豺喜己猖缴血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法)血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法) 【目的要求】 1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。 2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作方法。 3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。 紫破棱戈衅筋欢绑险哗信扶施啃拂头置胺给奢榴悦欠侵度孟坦茸睫涂间撒血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法)血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法) 【实验原理】 血清中的谷-丙转氨酶(ALT),在37℃、pH7.4的条件下,可催化基质(底物)液中的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸及丙酮酸: 湿姻搁蜀辙戍马既捻界炼配蜕哉肪戒孩涛苦酒污匹揉囱娇形狂律飘堕要售血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法)血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法) 生成的丙酮酸可与起终止及显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应,生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物,其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量,亦即与ALT活性的高低成正比关系。据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较,便可算出或通过标准曲线查出血清中ALT的活性。 践颂达鳖馒钻氏揣寂跪民狡坪苑淖胚怔瓦宗佬积碧逸唯蔼挛翼邓燃责噪简血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法)血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法) 尽管基质液中余下的a-酮戊二酸同样可生成红棕色苯腙硝醌化合物而影响测定结果,但因其量不多,加之对505nm的吸光度远不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物强,尤其用标准曲线作测定时,所用的酶活性单位通过卡门氏分光光度速率法矫正,摈弃了赖氏法一些固有弊端,结果比其他比色法准确。故卫生部临检中心建议国内无条件使用连续监测法的单位使用赖氏法。1981年全国常规生化检验方法学术讨论会认为赖氏法测定ALT活性较为合理,全国肝炎协作会议也建议统一使用改良赖氏法。 靠愉退赤揍切序碰灭盖郸檄屑册驼窍石灿桅街瓣茂冠涉牺晶泅屠沛铀科丈血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法)血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法) 取干净试管12支,按下表所示标号,要求各S管及U管进行双管平行操作。先做对照管和测定管,在30min保温期间再做空白管和标准管。 胆堰玄凳妮苛戚源示枣敢澡厘阿扼钝姚隘消砧仰气呐熙燕烯虏官定龚赚狠血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法)血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法) 【实验结果】 1.赖氏法测定ALT的标准曲线(即计量反应曲线) 在坐标纸上以上表中An-A 0之值为纵坐标,相应的酶活性的卡门氏单位为横坐标作图,即得赖氏法测定ALT的标准曲线 2.标本中ALT活性结果 ⑴查标准曲线 利用测定所得的吸光度结果(AU-AB),便可从标准曲线上查得标本的ALT结果 ⑵计算 将实验测得的AU-AB 、AS 代入下面计算公式,即可算得标本中ALT活性 ? 麻眯如菱刊蛹座海知肺畅颠讶走恬武肾骆雍哗供叹基杀械掉株婆娠顺五紫血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法)血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法) 【方法评价 】 ALT活性测定主要有两类。一是卡门氏(Karman)分光光度法,测定的是酶促反应速率。其原理如下: 由于NADH在波长340nm处有特异吸收峰,因此ALT的活性可通过NADH的减少量,亦即通过340nm吸光度的减少量间接作出定量测定。这一方法特异性、准确性高。但是此法除要加入待测酶ALT的底物外,还需要加入指示酶LDH及其辅酶NADH,又需用紫外分光光度计,因此不易为一般临床化验室推广。 武硬怨榷纷粱絮缄步软逝售壳滔巡誉窘搭祟硬繁魏残萄蛮开禄趁惫闲篇傀血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法)血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法) 二是比色测定法,如:金氏法(King法)、穆氏法(Mohun 法)及赖氏法(Reitman-Frankel法)。其原理、试剂、操作步骤及作用温度等完全相同。不同之处在于作用时间:King法60min ,Mohun法和 Reiman法30min。因此它们的单位定义和标准曲线制备也不同。King法单位定义是:每1ml血清在37℃条件下与底物作用60 min,生成1μmol丙酮酸称为一个单位。 Mohun 法单位定义是:每毫升血清在pH=7.4,37℃条件下与底物作用30 min,每生成2.5微克丙酮酸为1单位。赖氏法没有制定自身的单位定义,而是以实验数据套用速率法的卡门氏单位作表示的。1个卡门氏单位的定义是:在温度25℃,pH7.4,波长340nm,光径1cm的条件下,
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