适于人工饲料育和BmNPV-Bm表达系统的蚕品种(品系)筛选研究.pdfVIP

捅 要 BEVS是当前基因工程领域开发利用的四大表达系统之一，其中 rBmNPv_Bm表达系统在我国有着更大的发展优势，但在实用化方面还存在一 些有待解决的问题：首先，利用该表达系统生产医用疫苗和蛋白类药物时，必 须使用无菌蚕，需采用人工饲料无菌饲育：其次，重组病毒致病力弱，一般不 能食下感染，目前只能采取单头微量注射的方法接种病毒，操作烦琐，工效低 下，难以满足大规模生产的要求；第三，外源基因表达量受多种因素的影响， 表达活性有待进一步提高。 解决上述关键问题有多种途径，其中从宿主蚕品种的角度开展研究不失为 一条捷径。为此，本研究以家蚕生物反应器的实用化为目的，以人工饲料养蚕 为基础，主要从三个方面筛选适于作为BmNPV--Bm表达系统宿主的蚕品种， 即对人工饲料适应性好、重组病毒食下感染率高、外源基因表达量高的家蚕品 种。主要研究结果如下： 1调查了53个蚕品种对人工饲料的综合适应性，结果表明不同品种的摄 食性和适应性存在极显著差异。在所有供试品种中，以本专业新育成的春X月 (973X974)对人工饲料育的综合适应性最好，而且该品种产茧量高，其他经 济性状优良，是今后推广人工饲料育的较理想的品种。我们培育的广食性品种 杂A与明珠的杂交种的综合适应性次之，杂A是今后培育人工饲料育广食性品 X 9406、 种的理想基础材料。除此之外，目前生产上推广的菁松×皓月、9405 皓月B等也都是较适于人工饲料育的品种。 2不同蚕品种对含荧光增白剂VBL(重组病毒食下感染增效物质)颗粒饲 9406、杂A×明珠、菁松×皓月等品种都对含VBL饲料表现出很好的摄食性。 3不同蚕品种在重组病毒食下感染方面存在极显著差异。对重组病毒食 下感染率高的蚕品种有杂A、菁松×皓月、9405×9406和月X春等。 4重组病毒携带的外源基因在不同蚕品种体内的表达活性有较大差异， 在注射感染的情况下差异极显著。在供试品种中，以杂A、9405×9406、菁松 X皓月、月×春和161．162×136．1375个品种外源基因表达量较高。 5通过对不同蚕品种小蚕期人工饲料育的适应性、全龄人工饲料育的适 应性、对含荧光增白剂饲料的摄食性、对重组病毒的食下感染率以及外源基因 在蚕体内的表达量等性状的多轮筛选，最后确定杂A、春X月(月×春)、杂A VI 宿主。 6探讨了荧光增白剂VBL对外源基因表达活性的影响及其增进感染的作 用机理。结果表明，荧光增白剂VBL在一定浓度范围内(2％)对外源基因的 表达无显著影响。但添食VBL对家蚕中肠上皮细胞的超微结构有明显影响，主 要表现在微绒毛分泌机能降低，内质网腔膨胀，粗面内质网减少(附着的核糖 体减少)，细胞质出现异常结构，处于损伤(部分细胞器解体)状态。但在停止 48 添食VBL h后，处理区与对照区的中肠上皮细胞结构趋于一致。因此认为， 荧光增白剂VBL导致消化系统暂时性结构损伤，功能异常，从而促进了重组病 毒的食下感染。 关键词：家蚕；家蚕杆状病毒表达系统；人工饲料；蚕品种；表达宿主 VII Diet StudiesonSilkwormforArtificial Varieties Rearing and BmNPV-BmSystem Expressive Abstract BEVSisoneofthemost inthe popularexpressivesystemsgeneen百neefing