非对称性二甲基精氨酸在2型糖尿病大鼠肝脏内质网应激中的作用及其机制.pdfVIP

摘要 研究背景和目的： 糖尿病是严重危害人类健康的常见病；肝脏、脂 肪及肌肉组织对胰岛素的抵抗和胰岛p细胞功能障碍是2型糖尿病两大主 要的病理基础。大量的研究表明，2型糖尿病动物的胰岛D细胞、肝脏及 reticulum stress，ER 脂肪组织细胞都伴有较高的内质网应激(endoplasmic stress)，提示内质网应激与2型糖尿病的发生发展密切相关。 内质网是重要的细胞器之一，也是细胞中蛋白质合成及折叠的重要场 所。内质网的主要功能是通过糖基化及形成二硫键来折叠、装配新合成的 蛋白质，使之具有一定的立体构型，对蛋白质进行转录后修饰；此外，内 质网还在维持细胞内钙稳态中起重要作用。内质网功能正常是维持细胞存 活所必须的；凡引起内质网功能紊乱，导致未折叠和错折叠蛋白堆积在内 质网内的各种状况统称之为内质网应激。当未折叠或错折叠蛋白在内质网 内堆积时，首先，诱导内质网分子伴侣免疫球蛋白结合蛋白／葡萄糖调节 蛋白78(immunoglobulinbmdingprotein／glucose-regulatedprotein78，Bip／ GRP78)合成增加，从而增强内质网蛋白质折叠能力，以减少蛋白质在内 质网的堆积；其次，通过抑制蛋白质的翻译，减少内质网的加工负荷，以 减少蛋白质的进一步堆积；随后，当内质网折叠能力不能满足继续增多的 I 未折叠蛋白时，通过活化I型跨膜蛋白激酶／核糖核酸内切酶(type transmembrane kinase／endoribonuclease，IRE1)，剪接X盒结合蛋 protein 白1(X box．binding 蛋白，后者可以诱导内质网甘露糖甙酶．I样蛋白表达，促进内质网相关 性降解增加；最后，如以上过程仍不能维持蛋白质合成与折叠的平衡时， 通过上调CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白(C／EBP homologyprotein， CHOP)表达，诱导内质网介导的细胞凋亡部分细胞凋亡，以保证其它细 胞的正常功能。氧化应激和钙离子稳态改变是引起内质网应激的两大主要 原因。活性氧簇(reactive oxygen reticulum 的分子伴侣活性；另一方面，一些蛋白折叠酶活性的维持需要游离的巯基， 而活性氧簇可以直接攻击这一基团，从而抑制蛋白的正确折叠，加剧内质 网应激。抗氧化剂或自由基清除剂能够通过抑制真核翻译起始因子一20【 translationinitiationfactor (eukaryotic 2．alpha，elF．2a)磷酸化、Bip生成 增多、CHOP表达上调以及caspase．12活化等机制防止内质网应激。 oxide 我室和国内外研究表明，内源性一氧化氮合酶(nitricsynthase NOS)抑制物——非对称性二甲基精氨酸(asymmetric ADMA)升高在胰岛素抵抗、糖尿病以及糖尿病血管并发症中起重要作 用。内源性ADMA可抑制NOS活性，不仅减少一氧化氮(nitricoxide．NO) 解偶联，促进超氧化物生成；活性氧与内质网应激的密切关系以及内质 制NOS活性，增加氧自由基生成，诱导内质网应激。由于肝脏在调节血 糖浓度以及胰岛素抵抗和2型糖尿病发生发展中起重要作用，因此，本 课题以2型糖尿病大鼠肝脏和培养的大鼠肝细胞系(H4IIE)作为实验模 型，探讨ADMA在2型糖尿病大鼠肝脏内质网应激中的作用；为阐明2 型糖尿病的发病机制提供新的实验证据，为2型糖尿病临床防治开