酵母双杂交技术及应用的研究进展.pdfVIP

中国畜牧兽医 2013年第40卷第9期 生物技术 ·105· 酵母双杂交技术及应用的研究进展 郑立双1．李向楠2。孙城涛2，刘红羽2．刘勋2，贺明2，吕文发2 130118) (1．吉林农业大学生命科学学院，吉林长春130118；2．吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春 摘要：酵母双杂交技术是研究蛋白质与蛋白质相互作用的一种非常有效的分子生物学方法，它是一种能直接检测胞内蛋 白质相互作用较为简便、快捷、高效、敏感、广泛的方法。作者将主要介绍酵母双杂交技术的基本原理、应用及优缺点，现就酵 母双杂交技术及其应用的研究进展作一综述。 关键词：酵母双杂交技术；真核细胞；蛋白质 中图分类号：Q7 文献标识码：A 文章编号：1671—7236(2013)09—0105—04 随着分子生物学的研究，尤其是人类基因组计 结合结构域基因和GAL4激活结构域的基因上，构 划的迅速发展，功能基因组时代作为新兴研究领域 建成融合表达载体，从表达产物来分析2种蛋白质 越来越受到关注。功能基因组学的主要任务就是翻 相互作用的技术。随着人类、水稻和拟南芥等模式 译生物基因组中包含的全部基因及其所有蛋白质的 生物基因组测序的完成(李先昆等，2009)，酵母双杂 功能，尤其是大量未知基因的功能及其相应蛋白质 交技术将在许多研究领域中得到广泛的应用。 产物的功能(Soelliek等，2001)。蛋白质间的相互1酵母双杂交技术基本原理 作用在许多生物过程中扮演着不同角色，如细胞信 号转导和调控、大分子结构的形成及代谢途径等，是 始对真核细胞调控转录起始过程的认识，其起始位 错综复杂的生物系统的核心特征(Brockner等，点特异转录激活因子通常具有2个彼此可分割开的 2009；Suter等，2008)。筛选蛋白质互作的方法有结构域，即DNA特异结合域(BD)与转录激活结构 很多，主要有生物化学法(共纯化、亲和纯化和免疫 域(AD)。这2个结构域各具功能，互不影响，但一 共沉淀等)、表面等离子体共振技术、质谱技术、生物 个完整的激活特定基因表达的激活因子必须同时含 物理技术、噬菌体展示技术和酵母双杂交技术等 有这2个结构域，否则无法完成激活功能。GAL4 (Boireau等，2009)，而酵母双杂交技术是当前研究分子的DNA结合域可以和上游激活序列(UAS)结 蛋白质与蛋白质相互作用的主要方法(吴娟等， 合，而转录激活域则能激活UAS的下游基因并进 2005)，它将待研究的2种蛋白质基因分别克隆到酵 不能激活基因转录，单独的转录激活域也不能激活 母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA UAS的下游基因，它们之间只有通过某种方式结合 收稿日期：2013—01—28 在一起才具有完整转录激活因子的功能。根据转录 作者筒介：郑立双(1985一)，男，吉林人，硕士生，研究方向：生物 因子的这一特性，可将2种蛋白质与上面2个结构 大分子的结构与功能。 域建成融合蛋白，构建出BD-X质粒载体和AD-Y质 通信作者：吕文发，教授，博士。E—mail：wenfa2000@yahoo． corn．Cn 粒载体，将2个重组质粒载体共转化至酵母体内表 基金项目：国家自然科学基金；吉林省政府人才开发达。目前大多使用将2种重组载体转入2种酵母， 基金。 使2种酵母杂交配对融合而达到重组载体共转化的 Abstract：Baculovirus onbaculovirusasth