ΔNp63α基因过表达对人宫颈癌细胞SiHa基因表达谱的影响.pdfVIP

安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2017Feb；52(2) ·181· 网络 出版 时间：2017—1—2011：13 网络 出版地址 ：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／34．1065．R1113．039．html ANp63o~基因过表达对人宫颈癌细胞 SiHa基因表达谱的影响 韩晓慧 ，赵卫东 ，方慧英。 摘要 目的 分析 ANp63c~基因过表达时人宫颈癌细胞 si． 宫颈癌发生发展过程中的作用及调控机制。 Ha基因表达谱的变化，筛选受ANp63ct调控的潜在靶基因。 1 材料与方法 方法 利用慢病毒转染技术构建稳定过表达 ANp63a的转 染组细胞株 SiHa-ANp63a和对照组细胞株 SiHa．NC。应用 1．1 材料 人宫颈癌细胞 SiHa购 自中国科学院上 基因芯片技术研究两组细胞株基因表达谱变化，并进行生物 海生命科学研究院细胞资源中心；DMEM培养液和 学信息分析和实时荧光定量 PCR验证。结果 基因芯片数 胎牛血清购 自美 国Gibio公司；TRIzolReagent和 Li． 据共筛选出差异倍数 1．5倍 以上 的基因共 1405个，其 中 pofectamine2000购 自美 国Invitrogen公司；基因芯 843个基因在 SiHa—ANp63c~细胞 中表达上调 ，562个表达下 调。通过生物信息学分析显示这些基因主要参与细胞生长 片为 Agilent人 4×44K芯片全基 因组表达谱， 与周期、信号转导、细胞通讯、细胞黏附、细胞转移和侵袭等 ANp63a的 cDNA购 自美 国ORIGENE公司；质粒 功能 ，涉及的信号通路包括抗原加工提呈 、细胞因子与受体 pHelper1．0、质粒 pHelper2．0购 自广州莱德尔生物 相互作用 、细胞黏附分子 、补体系统等。结论 研究ANp63oL 科技有限公司；FastQuantRTKit购 自北京TIANGEN 调控的潜在靶基因或信号通路，对探索宫颈癌发生发展的机 公司；SYBRPremixExTaq 购 自日本 TaKaRa公 制有重要意义。 司；PlasmidMidiKit购 自德国QIAGEN公司。 关键词 宫颈癌；基因表达谱 ；ANp63c~；实时荧光定量 PCR 1．2 方法 中图分类号 R737．33 1．2．1 细胞培养 使用含 10％胎牛血清、0．1％青／ 文献标志码 A 文章编号 1000—1492(2017)02—0181—06 链霉素的DMEM培养液，置于37℃、5％CO 培养箱 doi：10．19405／j．cnki．issnl000—1492．2017．02．006 中贴壁培养，细胞在对数生长期时用胰酶消化传代 。 1．2．2 过表达ANp63oL宫颈癌细胞株的建立 扩 子宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤 ， 增全长ANp63acDNA，与经 XhoI和 BamHI双酶 近年来呈上升和年轻化趋势，严重威胁女性生命健 切的pLVX．IRES．ZsGreenl慢病毒载体进行连接，构 康 ¨。人乳头状瘤病 毒 (humanpapillomavirus，