惠东地区产ESBLs大肠埃希菌主要基因类型.docVIP

惠东地区产ESBLs大肠埃希菌主要基因类型 　　[摘要] 目的 探讨惠东地区产ESBLs大肠埃希菌的主要基因类型。 方法 收集本地区临床各科室明确诊断为院内感染的标本，经分离获得大肠埃希菌483株，采用API 20E进行产ESBLs初筛，并参照CLSI文件M100-S22推荐的纸片表型确证试验进行确证。对确证产ESBLss大肠埃希菌进行基因型检测和PFGE检测。 结果 （1）API鉴定试剂条（API 20E）试验提示本研究所收集483例院内大肠埃希菌菌株中，产ESBLs阳性菌株共214例；确证试验结果提示，214例菌株均为产ESBLs阳性菌，符合率为100%；（2）214株产ESBLs大肠杆菌共有3种基因型和6种PFGE型，其中基因型TEM最多，共123株（57.5%），CTX-M51株（23.8%），SHV40株（18.7%）；PFGE图谱结果提示，3a和6a最多见，分别为70株和63株，其余分别为1a（30株）、2（21株）、4（18株）和18（12株）；（3）产ESBLs大肠埃希菌来源：214株产ESBLs大肠埃希菌，主要来源于重症监护室（118株）、血液科（39株）、呼吸科（34株），以及其他相关科室（共23株）。 结论 现阶段本地区院内感染大肠埃希菌标本中，产ESBLs大肠埃希菌所占比例较高，其中以基因型TEM最多，PFGE型3a和6a最多见；病原菌主要来源于重症监护室、血液科和呼吸科。 [关键词] 超广谱β-内酰胺酶；大肠埃希菌；院内感染；基因类型 [中图分类号] R446.5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）05（b）-0108-02 近年来，大量研究结果表明，随着广谱抗生素的广泛使用，院内感染发生率呈现出逐年增长的趋势，且院内感染与患者住院时间、住院费用以及院内死亡率紧密相关[1-2]。 大肠埃希菌是临床常见致病菌之一，由于抗生素的广泛使用，多重耐药大肠埃希菌已成为现阶段院内感染最常见的致病菌[3-4]。多重耐药大肠埃希菌的流行，不仅给社会及患者带来了沉重的负担，还在一定程度上影响了医疗质量的提高。由质粒介导的超广谱β-内酰胺酶（extended spectrum beta lactamases，ESBLs）是多重耐药大肠埃希菌广泛耐药的主要机制之一[5]。因此，积极寻找产ESBLs大肠埃希菌耐药基因及分析其流行病学特点对指导抗感染方案的选择，以及改善患者的预后均具有重要的临床价值。 本研究拟对API鉴定试剂条（API 20E）鉴定试验检测出的产ESBLs大肠埃希菌进一步分析其耐药基因型，进一步了解产ESBLs大肠埃希菌对本地区目前常用抗生素的耐药情况及在本院的流行情况，从而可以为今后进一步研究提供基础。 1 材料与方法 1.1 产ESBLs大肠埃希菌菌株来源 标本收集时间为2012年1月～2013年3月，来源主要为惠东地区临床科室标本：血、尿、痰、引流液、穿刺液、分泌物、胆汁中分离的纯培养大肠埃希菌菌株483株。 1.2 菌株鉴定 采用法国Biomerieux公司的API鉴定试剂条（API 20E）进行鉴定，得到初步可疑ESBLs大肠埃希菌的结果。 1.3 产ESBLs确证试验 将上述初步可疑ESBLs阳性的菌株进一步参照CLSI文件M100-S22（2012年版本）推荐的纸片表型确证扩散法标准进行，采用头孢噻肟（30 μg），头孢噻肟/克拉维酸（30 μg/10 μg），头孢他啶（30 μg），头孢他啶/克拉维酸（30 μg/10 μg）纸片检测，对两组中任何一个药物加克拉维酸的抑菌圈直径与不加克拉维酸的抑菌圈直径相比，差值≥5 mm时，可确证该菌株产ESBLs。质控菌为大肠埃希菌ATCC25922（敏感株/阴性株）和大肠埃希菌ATCC35218（产β-内酰胺酶株/阳性株）。敏感试验：采用纸片扩散法（纸片为Oxoid公司，英国）， 1.4 对明确产ESBLs的大肠埃希菌进行下述检测 1.4.1 耐药基因型检测：荧光定量PCR反应。所有标本均送中山大学达安基因公司进行检测，采用荧光定量PCR法检测大肠埃希菌TEM型β-内酰胺酶基因，PCR试剂盒由中山大学达安基因公司提供。肺炎克雷伯菌ATCC700603为阳性对照，大肠埃希菌ATCC25922为阴性对照。仪器：ABI 7500全自动荧光定量PCR仪，ABI 9700 PCR仪，ABI 3900台式高通量DNA合成仪，科大创新HC-7018R高速冷冻离心机。 1.4.2 脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型：所有标本均送中山大学达安基因公司进行PFGE检测，采用限制性内切酶消化大肠埃希菌染色体DNA，用1%琼脂糖凝胶于CHEF-DR-Ⅱ型脉冲场凝胶