低氧、低氧耐力训练对大鼠肌球蛋白重链表达影响.docVIP

低氧、低氧耐力训练对大鼠肌球蛋白重链表达影响摘要：目的在于探讨低氧及低氧耐力训练条件下肌球蛋白重链（MHC）转换的方式，了解低氧及低氧运动下骨骼肌微细组成的改变。方法：选取SD大鼠30只，随机分为常氧对照组（NC）、低氧对照组（HC）和低氧训练组（HT）。HC组和HT组动物均生活在模拟海拔4000米高度的低氧舱中，HT组进行跑台练习，28天后取浅层胫前肌。RT?PCR方法测定四种MHC亚型mRNA表达，SDS?PAGE方法测定各种MHC亚型蛋白表达。结果：低氧及低氧运动均使MHC－Ⅱa 蛋白表达显著下降, MHC－Ⅱx和MHC－Ⅱb 蛋白表达显著升高；低氧影响MHC基因表达为MHC－Ⅱa mRNA显著升高，MHC－ⅠmRNA不显著下降；低氧运动使MHC－Ⅱb mRNA显著升高。结论：低氧及低氧训练使MHC蛋白和基因表达慢型向快型转化。 关键词：肌球蛋白重链；低氧；低氧运动 中图分类号：G804.2文献标识码：A文章编号：1007-3612(2008)07-0919-03 低氧环境已显示可引起骨骼肌形态学显著的改变，如毛细血管密度增加、平均肌纤维横截面积下降，同时线粒体数目、肌红蛋白明显增多，机体的有氧代谢能力得到改善。 伴随着代谢方式等一系列的改变肌纤维类型也可能会发生相应的调整。如Itoh［1］的研究表明雄性SD鼠置于模拟?4 000 m低氧舱10周后，比目鱼肌快缩氧化糖酵解型肌纤维（FOG）增加，慢缩氧化型纤维（SO）减少；Bigard等对Wistar鼠4 000 m高度游泳训练14周的研究［2］显示，高海拔耐力练习引起快肌趾长伸肌（Extensor digitorum longus，EDL）和足底肌（Plantaris，PLA）Ⅱa型纤维增加，同时Ⅱb减少。 由于肌纤维分类方法的差异使得对于低氧及低氧耐力训练影响肌纤维组成的报道结果存在差异。现在常用的肌纤维分类方法有肌原纤维ATP酶（肌球蛋白ATP酶）、肌球蛋白重链(MHC)单克隆抗体免疫组化、肌球蛋白重链(MHC) 聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法。 肌原纤维ATP酶（肌球蛋白ATP酶）的方法一般只能区分出Ⅱa、Ⅱb和Ⅰ三种肌纤维［3］；免疫组化方法由于缺乏特异性的Ⅱx MHC抗体，目前还不能检测到Ⅱa与Ⅱx或Ⅱx与Ⅱb同时存在的纤维类型。肌球蛋白重链(MHC) 聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法可以清晰地看到四种纯合的肌纤维（Ⅱa-MHC、Ⅱb-MHC、Ⅱd/x-MHC和Ⅰ-MHC），依其敏感性好、特异性强、可重复的特点广泛用于分离MHC。 Talmadge［4］总结多人研究结果发现，由MHC确定的肌纤维最大收缩速度顺序为ⅠⅡa Ⅱx Ⅱb，除了收缩速度存在差异外，代谢特性也各不相同。因此，研究低氧及低氧耐力条件下MHC组成的改变对于了解低氧训练影响骨骼肌收缩特性具有重要意义。 1材料与方法 1.1实验动物与分组7周龄健康雄性Spraque Dawley(SD)大鼠30只，平均体重(210±20)g，购自河北医科大学实验动物中心，为国家二级卫生动物。饲养温度控制在(22±3)℃，动物自由进水进食，适应性喂养两天后，随机分为三组，每组10只: 常氧对照组（Normoxic Controls,NC） 低氧对照组（Hypoxic Controls,HC） 低氧训练组（Hypoxic Training,HT） 1.2训练方式HC组和HT组动物均生活在模拟海拔4 000 m高度的低氧舱中（氧浓度12.7％），每天至少保证22 h低氧时间。 低氧训练组经5 d跑台适应后，进入正式训练。训练在常氧条件下进行，训练方式为跑台练习： 跑台坡度＋10°，跑速20 m／min，每天1次，每次1 h，每周训练6 d，28 d后取材。 1.3取材腹腔注射戊巴比妥钠麻醉（45 mg/kg），迅速剥离两侧浅层胫前肌，去除结缔组织，锡纸包叠后置于液氮中冻存。 1.4主要测试方法和仪器 1) 骨骼肌肌球蛋白重链(MHC)蛋白组成： 十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳方法（SDS）。参照Talmadge(1993)［5］ 2） 骨骼肌MHCⅠ、Ⅱa、Ⅱx/d、Ⅱb四个亚型mRNA 基因表达：（RT-PCR方法 ） 低氧设备：HYPOXIC TRAINING SYSTEMS, Hypoxico Inc.(USA) PCR引物设计：PCR引物由北京奥科生物技术有限责任公司设计、合成。 引物序列如下表： 1.5统计分析 采用SPSS11.5统计软件，利用多因素方差一般线性模型（GLM）LSD方法检验各组间是否有显著性差异，?P?0.05具有统计学的显著意义。 2结果