产琥珀酸大肠杆菌工程菌株的构建 construction of engineered escherchia coli for succinate producition.pdfVIP

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2017-11-22 发布于上海
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产琥珀酸大肠杆菌工程菌株的构建 construction of engineered escherchia coli for succinate producition.pdf

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产琥珀酸大肠杆菌工程菌株的构建 construction of engineered escherchia coli for succinate producition

2010年第2期中国酿造研究报告总第215期 ·25· 产琥珀酸大肠杆菌工程菌株的构建岳方方，姜岷木，马江锋，于丽，刘树文，韦萍 (南京工业大学生物与制药工程学院材料化学工程国家重点实验室，江苏南京210009) 摘要：大肠杆菌在厌氧条件及不额外添加电r受体的条件下可利用葡萄糖进行混合酸发酵，主要产物为甲酸、乙酸和乙醇，丁-二酸及乳酸含最较低。为减少副产物的生成，使更多的代谢流流向丁二酸，本研究拟失活厌氧条件下甲酸、乙酸及乳酸主要生成途径相关的酶(乳酸脱氢酶和丙酮酸甲酸裂解酶)。借助Red重组系统和位点特异性重组技术，无痕敲除了野生大肠杆菌W3110染色体上出发菌株解除了生长抑制，在89，L初糖条件F，发酵48h，菌体密度可提高至OD。02．5，产物丰要为丁二酸(2．8g／L)，乙酸含量很低，无甲酸、乳酸牛成。关键词：大肠杆菌；琥珀酸：丙酮酸羧化酶；RED重组：无痕敲除中图分类号：Q786 文献标识码：A 0)02—0025—04 文章编号：0254—5071(201 Construction Escherichiaco／Jforsuceinate ofengineered producition YUE Fangfang，JIANGMin+，MAJiangfeng，YULi，LIUShuwen，WEIPmg Pharmaceu6calEngineenng,Nanjing Abstract：Underanaerobicconditionsandintheabsenceof electron colifermentstoamixtureof aceeptors，Escherichiaglucose products exogenous of and wellasa oflaerateand ordertoreducethe lactateand consistingacetate，formateethanol，as smallamounts succinatc．In CO·products formate， aIdh doublemutanthasbeenconstructedbasedontheREDrecombinationandthe recombinant pn system site—specific technology．The in of would resultsindicatedthatdeficientbothofthetwo showed defectsbecause accumulationwhich enzymes significantgrowth pyruvate the affect E．col／lacksthe negatively phosphoenolpyruvate—dependentsugartransport．Since anapleroticenzymepyruvate accumu