PinXl基因真核表达载体的构建及其对乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用.pdfVIP

第 l9卷 第 6期 上海大 报 (自然科学版) Vo1．19 NO．6 2013年12月 JOURNALOFSHANGHAIUNIVERSITY (NATURALSCIENCE) Dec．2013 DOI：10．3969／j．issn．1007—2861．2013．06．015 PinX1基因真核表达载体的构建及其对乳腺癌 MCF．7细胞增殖的抑制作用 胡 宗 ， 梁桑华。， 马文丽 一，郑文岭 ，。 (1．上海大学 电子生物研究所，上海 200444；2．南方医科大学基因工程研究所，广州 510515 3．华南基因组研究中心，广州 510800) 摘要： 探讨了P钆 1基因在乳腺癌 MCF一7细胞生长和细胞周期中的作用，初步探讨了该基因用于乳腺癌临床治 疗的可行性．采用 RT．PCR技术从293一T细胞中扩增 Pin 1基因，将其克隆入真核表达载体 pEGFP—C1中，再 将重组质粒转染MCF．7细胞．通过real—timePCR检测P佗 1基因的mRNA表达，用MTT法检测转染前后细 胞生长曲线的变化，用流式细胞仪检测转染 目的基因后细胞生长周期的改变．检测结果表明，P 基因已经在转 染后MCF．7细胞的细胞核内稳定表达，乳腺癌细胞生长明显减缓fP0．05)，增殖变慢(PO．05)，细胞生长阻滞于 GO／G1期，说明P 基因可抑制乳腺癌MCF一7细胞的生长和增殖． 关键词 ：乳腺癌；P几 基因；载体构建；细胞增殖 中图分类号：R736．3 文献标志码 ：A 文章编号：1007-2861(2013)06—0631，05 Construction ofRecombinantEukaryoticExpression Vectorfor P X and ItsRolesin InhibitingProliferation of Human BreastCancerM CF一7CellLine HU Zong ， LIANG Sang—hua ， MA W en—li ， ZHENGW en—ling ，3 (1．Bio—electronicCenter，ShanghaiUniversity,Shanghai200444，China； 2．InstituteofGeneticEngineering，SouthMedicalUniversity，Guangzhou 510515，China； 3．SouthChinaGenomicsResearchCenter，Guangzhou510800，China) Abstract：ThispaperexplorestheeffectsofP 礼 1geneonthegrowth andthecellcyclesofbreastcarcinoma celllineMCF一7andthepotentialintreatmentofbreastcancer．TheP nX 1mRNA wasamplifiedfrom 293一T cellwith RT．PCR andinsertedintopEGFP—C1vector．TherecombinedeukaryoticexpressionvectorofPinX 1 Was confirmedbyenzymedigestion)andtransfectedintothebreastcarcinomacelllineMCF一7usingaliposome method．TheexpressedmRNA wasdetectedbyreal—timePCR，and thecellgrowthand cellcyclesbyM TT and f