甘草酸微生物转化菌的筛选鉴定及发酵条件优化.docVIP

甘草酸微生物转化菌的筛选鉴定及发酵条件优化 　　摘要：首先，采用单因素方法对碳源、氮源、发酵接种量、初始pH、发酵时间、发酵温度等因素进行考查，在此基础上进行4因素3水平的正交试验优化。得到的优化发酵条件是甘草浸出液10%，发酵温度40 ℃，pH 5.0，接种量10%，装液量75 mL/250 mL，发酵时间为6.5 d，180 r/min。在最优条件下，甘草次酸的量达到7.67 mg/mL。 　　关键词：米曲霉；微生物转化；甘草；甘草酸；甘草次酸；优化 　　中图分类号：TQ925 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）10-1918-06 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.10.030 　　Screening and Identify of the Glycyrrhizic Acid Microbial Transformation and Optimization of Fermentation Conditions for Glycyrrhetic Acid by Microorganism 　　SU Long，LIANG Gang-bo，CHEN Guang-li，WEI Yu-hua，PAN Xue-mei，WANG Xue-ru 　　（College of Biology Pharmacy of Yulin Normal University，Yulin 537000，China） 　　Abstract：Firstly，using single-factor test，the effects of these 5 parameters，i.e.，carbon source，nitrogen source，the inoculation amount，initial pH of medium， fermentation time，fermentation temperature on the glycyrrhetic Acid yield were studied. Then the key parameters of fermentation conditions were statistically optimized through the orthogonal array experiments with 4 factors in 3 levels. The optimal conditions were licorice digester liquid 10%，initial pH 5.0，rotation speed 180 r/min，10% inoculum size in 75 mL working volume（in 250 mL flasks） at 40 ℃ for 6.5 d. Using these conditions，the the glycyrrhetic acid yield was 7.67 mg/mL. 　　Key words： aspergillusoryzae；microbialtransformation； licorice； glycyrrhizic acid； glycyrrhetic acid； optimized 　　甘草?儆诙箍浦参铩Ｖ泄?西部、俄罗斯及欧洲分布较多。自古以来，甘草在很多国家广为药用，尤其在中国医药学中许多配方都有甘草和甘草浸膏。中医理论认为甘草性平味甘，具有和中缓急、润肺、解毒、祛痰、止咳、通经脉、利气血、调和诸药等功效，为临床广泛应用[1]。近年来，随着药理活性试验方法的发展和完善，发现甘草还具有明显的抗炎，抗溃疡作用和抗变态反应作用[2]。日本学者熊谷朗[3]进一步证明甘草还具有抗病毒性肝炎，慢性肝炎作用。彭子模等[4]??报道了甘草具有抗爱滋病毒的作用。大量研究证明，上述作用主要归因于甘草的主要成分甘草甜素和甘草次酸及其衍生物。因此，甘草次酸及其衍生物的研究开发，是近几十年来各国科学家研究的热点之一。 　　甘草的肠道代谢及药代动力学研究[5，6]表明甘草酸在肠道内缓慢地转化为甘草次酸。甘草酸经人口服后，血浆中主要测出甘草次酸，而未测到甘草酸。普通和无菌大鼠均给予甘草酸口服，普通大鼠血浆中可以测出甘草次酸，但没有原形物3甘草酸，而在无菌大鼠血浆中未测到甘草次酸。分别口服甘草酸和甘草次酸，血浆中甘草次酸的MRT值出现显著差异，说明肠道内甘草酸缓慢地转化为甘草次酸[7-10]。然而，在甘草中甘草次酸的含量较低，只有0.1%左右，其前体甘草酸的含量则比较高，在3.7%～8.3%。因此，利用微生物与中草药甘草共同发酵生产甘草次酸具有非常重要的意义。 　　甘