“酸化水-超滤”一体化技术提取IBDV IgY的研究.pdf

畜牧兽医 试验综逋 “酸化水一超滤”一体化技术 提取 IBDVIgY的研究 胥桂华 ，，苗玉和 17马成国 ，米宏有 ’，张勇飞 ，王 刚 ’ (1．辽宁省益康生物制品有限公司，辽宁 辽阳 111000； 2．中国农业大学农学与生物技术学院，北京 100081) 中图分类号 S852．4 文献标识码 A 文章编号 1672—9692(2010)07—0069—03 7…’。…’。…。…‘。…‘。‘…’…‘。…’。…’。…’…‘。’…’。…’…‘’…‘…‘‘’…‘’‘…’……‘’…‘。。…。…‘。…‘’…‘’’…’。…’…‘…‘‘’‘…。…‘。…‘’。…。…。…‘’。…。…‘’。…。‘”“。…’…‘’： [摘 要]用 “酸化水一超滤”一体化技术从高免鸡卵黄中提取 IgY，其提取率为 92％，适宜条 件是：①原始高免卵黄14倍的蒸馏水做溶剂，pH值在7．0，静置孵化温度 16℃，时间72h，吸出 i ；上清；②沉淀卵黄8倍的蒸馏水做溶剂，pH值在 7．O0，静置孵化温度 16℃、时间24h，吸出上清，÷ ?合并上清，进行超滤。超滤采用分子量为 30】(D的滤膜 ，可使上清液浓缩 80倍以上，IgY被完全截 ? 留，去除水分和小分子杂质达到浓缩 IgY的目的。 ； [关键词]高免卵黄；IgY；酸化水；超滤；提取 ÷ 禽类产生和维持高水平特异性抗体是相当容 2．4kg阴性健康兔子进行免疫，2m]／次，每次免 易的，卵黄是特异抗体的良好来源，它提供的特 疫间隔时间 1周，计为3次免疫。最后 1次免疫 异性抗体超过了传统抗体产品的优点被许多文献 2周后，进行心脏采血，分离并收集血清。用双 已证明。哺乳动物的抗原在禽类体内比哺乳动物 向琼脂扩散实验测二抗效价达到 1：4，所用抗原 体内更有产生特异抗体的潜力，这是因为禽类和 含量为 0．125mg／ml。将血清分装小量后冷冻保 哺乳动物之间存在着生理差异，更为重要的是由 存 ，用于单 向琼扩试验，测定样品中IgY的含 禽类产生的特异抗体比哺乳动物产生的特异抗体 量 。 价格低、更方便、无毒副作用，更适应于现代人 1．3 超滤器 截流分子量 30kD—PTTK膜板式超 以及动物预防应用。 滤器，用于浓缩卵黄稀释液上清 (吉林百盛生物技 从卵黄中分离和纯化 IgY已有许多方法被采 术有限公司)。 用，然而这些方法制备的多种特异抗体由于含有 1．4 酸化水提取IgY方法 通过大量的试验探 许多有害试剂不能成为食品辅料，限制了卵黄抗 索，根据最大限度地提高IgY回收率的要求，确 体的使用价值 。用 “酸化水一超滤”一体化技术 定高免卵黄的稀释倍数和稀释液的pH值。将原 从高免鸡卵黄 中提取 IgY，简单、快速、有效， 始高免卵黄和规定的稀释倍数的蒸馏水混合，用 能得到高活性IgY。 0．1mo]]LHCI溶液和 0．1mo1]LNaOH溶液调到预 1 材料和方法 设的pH值。 1．1 高免鸡蛋 用 自制鸡传染性法 氏囊病 1．5 卵黄稀释液的上清液超滤方法 将卵黄稀 (IBD)灭活疫苗免疫蛋鸡，应用双 向琼脂扩散试 释液的上清液经截流分子量 30kD板式超滤器， 验检测相应的卵黄抗体效价 ，IBDV卵黄抗体的 进行浓缩。 琼扩效价达到 1：32时，收集高免鸡蛋，4cC保存 1．6 SDS分析 用 10％～12％梯度快速凝胶 备用 。 和考曼斯亮兰根据说 明书染色制成快速 电泳系 1-2 兔抗鸡Ig蹴 体 取IgY纯品(I4881—10mg， 统，对所取样品进行测定。超滤过程中，在不同 Chicken—IgG，美 国sigma公司)3mg