HPLC法测定祛瘀降脂片中芍药苷含量.docVIP

HPLC法测定祛瘀降脂片中芍药苷含量 　　摘要：目的： 建立祛瘀降脂片中芍药苷的含量测定方法。方法： 采用HPLC法，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱，流动相为甲醇_0.1%磷酸溶液（14：86），流速为1.0ml/min；检测波长为230nm；柱温为30℃。结果：采用高效液相色谱法测定芍药苷的含量，线性关系良好，线性范围为0.1634ug―1.634ug， 平均加样回收率为98.48%，RSD%为1.39% 。结论：所建立的方法简便易行、准确可靠，可用于祛瘀降脂片的质量控制。 关键词：祛瘀降脂片；芍药苷；HPLC；含量测定 中图分类号：R972+.6 文献标识码：C 文章编号：1005-0515（2013）9-010-02 祛瘀降脂片系我院自制剂，由大黄、白芍、桃仁、地黄、山楂、泽泻、白术等11味中药组成。具有活血化瘀、祛除痰浊、疏通脉络的功效，主要用于高血脂症、脑血栓后遗症、动脉粥样硬化。白芍为方中要药，功能养血调经、柔肝止痛、平抑肝阳。现代药理研究发现白芍中的主要成分芍药苷能扩张血管、保护脑缺血、抗血小板聚集、抗血栓形成，有提高抗高脂肪高胆固醇引起的促血栓形成的作用。原标准无含量控制项，笔者采用HPLC法对方中白芍的主要成分芍药苷进行了含量测定[1-4]，为其质量控制提供依据。现报告如下。 1仪器、试药与材料 Waters 510型高效液相色谱仪（美国）、Waters 486紫外检测器、威玛通用多媒体色谱数据工作站；SB3200超声清洗机（上海必能信超声有限公司）、AEL_200电子天平（日本岛津）。芍药苷对照品（批号：110736―201136）购自中国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯（天津市科密欧化学试剂有限公司），水为重蒸馏水（自制），其他试剂均为分析纯。祛瘀降脂片由本院制剂室提供（批号2012110520130201。 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱： DiamonsilC18（4.6mm×250mm，5um）；流动相：甲醇_0.1%磷酸溶液（14：86）；流速为1.0ml/min；检测波长：230nm；柱温：30℃。 2.2 溶液制备 2.2.1对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含60ug的溶液，即得。 2.2.2供试品溶液的制备方法 取本品20片，除去糖衣，精密称定，研细，取2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（300W，40KHz）30min， 放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.2.3 阴性对照品溶液的制备 按照祛瘀降脂片的制备工艺制备缺白芍的阴性样品，按上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。 2.3 系统适用性试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液，在上述色谱条件下分别进样10ul，记录色谱图。结果表明，供试品溶液在对照品溶液色谱峰相应位置上有相应峰，而阴性对照品溶液色谱中无此峰，说明阴性无干扰。在此条件下，芍药苷峰与样品中其它组分色谱峰可达基线分离，分离度大于1.5；理论板数按芍药苷峰计算，应不低于3000。（见图1） A-对照品 B-供试品 C-阴性对照品 图1 祛瘀降脂片HPLC图 （1_芍药苷） 2.4 线性关系考察 精密称取芍药苷对照品16.34mg，置50ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液。精密量取0.5、1.0、2.0、3.0、5.0ml，分别置10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，按上述色谱条件分别进样10ul测定。以进样量（ug）为横坐标（X），峰面积积峰值为纵坐标（Y）绘制标准曲线，得回归方程为：Y35X+52424.3789，r=0.9992（n=5），结果表明：进样量在0.1634ug―1.634ug范围内线性关系良好。 2.5 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液10uL，重复进样6次，测定芍药苷峰面积。结果表明，机器精密度良好。RSD%为1.06%（n=6） 2.6 稳定性试验 对同一供试品溶液（批号，于0、2、4、8、16、24h依法测定，记录芍药苷峰面积，试验结果表明，在24h内被测物稳定。RSD%为1.21%（n=6）。 2.7 重复性试验 对同一批样品（批号，平行测定6份，计算芍药苷含量。结果平均含量为1.120mg/g，RSD%为1.70%（n=6），结果表明，重复性良好。 2.8 加样回收率试验 取已知含量为1.120m