实验7基因组DNA的提取(综合性设计实验).ppt

实验7 综合性设计性实验 基因组DNA的提取 实验目的 1. 学习从生物体中分离核酸的原理和方法 2. 掌握测定核酸的原理和方法 3. 掌握核酸的琼脂糖凝胶电泳的原理和方法 4. 培养学生创新实践能力和团队合作精神，并强化科研反哺教学效果。 选用材料 1. 植物：自己准备 注意：实验体系要尽量小！ 2. 理论准备 不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获得可用的DNA大分子。尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用，因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时, 应考虑除去多糖和酚类物质。 实验方案 1. 选择一种材料，查阅文献，并设计好提取基因组DNA的路线，及DNA纯度的检测，含量的检测。 2. 请详细列出所需试剂的清单，以备订购 以及详细的实验仪器列表，包括玻璃仪器和大型实验仪器 名称（包括浓度、体积） 成分 质量或体积 配制方法 备注 20×TAE缓冲液 pH8.5 ( ?mL ) Tris碱 ？g 冰醋酸 ？ML Na2EDTA.2H2O ？g 名称 规格 数量 备注 容量瓶 10mL 2 实验要求和注意事项 1、四人一组 。 2、严格控制实验时间，在规定的时间内完成实验的设计、操作、结果分析和报告。 3、严格按照科研论文的格式写出实验报告。 4、每个小组在全班同学前汇报实验结果。 5、注意协调安排时间，保证休息。 6、注意安全。 时间安排 1. 提交初步方案、特别是所需试剂清单 2. 上午：实验准备；下午：实验 3. 进行报告 实验条件 离心机： 1.5 ml 冷冻高速离心机/高速离心机 5 ml 冷冻高速离心机 50 ml冷冻高速离心机/低速离心机 离心管：注明型号 DNA纯度的检测 分光光度计260nm、280nm的吸光值，并计算比值。 核酸在260nm附近有强吸收，而蛋白质在280nm附近有强吸收 A260/A280 1.8-2.0之间纯度较高 若小于1.8，则有蛋白质污染 若大于2.0，则有酚类物质污染 图1 玉米幼叶基因组DNA琼脂糖电泳图（1—7ul） 第一次实验结果 第二次实验结果 Cx M C Bx B A M Cx C Bx B A 实验结果——第一次电泳 A：酚/氯仿法 B：碱裂解法 Bx：碱裂解法原液稀释一倍后的稀释液 C：碘化钾法 Cx：碘化钾法原液稀释一倍后的稀释液 M：Marker 实验结果 图2 第三次实验结果 图3 λDNA/HindⅢ 标准条带