组蛋白修饰对COPD大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞趋化因子表达的影响.pdfVIP

360· 中国呼吸与危重监护杂志2010年7月第9卷第4期 ChinJRespirCritCareMed，July2010，Vo1．9，No．4 论 著 · 组蛋 白修饰对 COPD大鼠肺泡 Ⅱ型上皮细胞 趋化因子表达的影响 甘丽杏 李成业 郭雪君 上海交通大学医学院附属新华医院呼吸科(上海 200092) 【摘要】 目的 探讨 COPD大鼠肺泡 Ⅱ型上皮细胞(AECII)炎症因子表达是否与组蛋白修饰 有关。方法 熏烟法建立大 鼠COPD模型。取大鼠肺组织进行病理观察，提取AECⅡ进行碱性磷酸 酶染色鉴定和电镜鉴定；实时定量 PCR检测AEC11三种趋化 因子 ：单核细胞趋化蛋 白1(MCP一1)、 IL一8及巨噬细胞炎性 蛋 白2 (MIP一2 )的 mRNA表达；Westernblot检 测组蛋 白去乙酰化 酶 2 (HDAC2)蛋 白表达；染色质免疫共沉淀 (ChIP)检测趋化因子启动子区组蛋 白H3、H4乙酰化和 H4K9 甲基化修饰情况。结果 COPD组 IL一8、MCP一1、MIP-2c~mRNA表达较正常对照组分别增加 4．48倍、 3．14倍、2．83倍 ；COPD组AEcⅡ细胞HDAC2蛋白表达较正常对照组降低 (0．25±0．15比0．66±0．15， P0．05)，且HDAC2的下降程度与 IL一8、MCP一1、MIP一20【mRNA表达增高程度呈负相关 (r值分别为 一 0．960、一0．914、一0．928，P均 0．05)。COPD组趋化因子基因启动子区H3、H4乙酰化水平较正常对 照组均升高，H4K9甲基化水平则降低 (P均 0．05)。结论 COPD模型大 鼠AEcⅡ的IL一8、MCP一1、 MIP一2d三种趋化因子基因表达增加，HDAC2介导的组蛋白修饰在COPD炎症反应中发挥重要作用。 【关键词】 慢性阻塞性肺疾病；肺泡 Ⅱ型上皮细胞 ；组蛋白去乙酰化酶；趋化因子 EffectsofHistoneModificationonChemo~nesExpressioninAlveolarEpithelialTypeⅡ Cellsina RatModelofCOPD GANLi—xing，L1Cheng—ye，GUOXuejun．DepartmentofRespiratoryMedicine，Xinhua Hospital，ShanghaiJiaotongUniversitySchoolofMedicine．Shanghai，200092，China CorrespondingAuthor：GUOXue-jun，E—mail：guoxjz@yahoo．corn．ca 【Abstract】 0bjective Toinvestigatetheeffectsofhistonemodificationontheexpressionof chemokinesinalveolarepithelialtype1Icells(AEC1I)inaratmodelofchronicobstructivepulmonary disease(COPD)．Methods 20SDratswererandomlyassignedtoanormalcontrolgroupandaCOPD group．TheratmodelofCOPDwasestablishedbycigarettesmoking．Lunghistologicalchangeswereobserved byHE staining．AECII cellswereisolatedandidentifiedbyalkalinephosphatasestainingandelectron microscopic．ThemRNAexpressionsofmonocytechemoattractantprotein(MCP)一1，IL一8，andmacrophage inflammatoryprotein (MIP)一2 weredetectedbyreal-timequantitativePCR．Theexpression ofhistone deacetylase(HDAC)2wasmeasuredbywestern blot．Chromatinimmunoprecipitation(ChIP)wasusedto detectH3and H