重金属铅多克隆抗体的制备及鉴定.pdfVIP

180 2010,VoL31，No．13 良 晶 科 学 ※生物工程 重金属铅多克隆抗体的制备及鉴定 翟一凡1，向军俭 一，唐 勇 1，郭常伟1，刘小锋z，杨红宇 · (1．暨南大学抗体工程中心，广东广州 510632；2．广州市千江企业有限公司，广东 广州 510632) 摘 要：目的：合成铅离子完全抗原，并对其进行鉴定；用合成的完全抗原免疫 Balb／c小鼠制备多克隆抗体， 鉴定效价和特异性。方法：用双功能螯合剂p-SCN．BnDTPA将pb2~与载体蛋白BSA和OVA偶联在一起，合成 免疫抗原(Pb．DTPA．BSA)和检测抗原(Pb—DTPA—OVA)，并通过SDS．PAGE、紫外扫描、电感耦合等离子体 (ICP) 检测抗原中pb2+含量，以及通过免疫Balb／c小鼠，采集血清进行间接ELISA和竞争ELISA检测。结果：两种合 成的抗原相对于各 自的载体蛋白均出现了蛋白条带滞后，紫外吸收峰偏移等现象；免疫的4号和5号Balb／c小鼠的 抗血清效价达 1：400000；与OVA无交叉反应，ELISA检测 Icso值为 1．5ng／mL，与Fe3+有近 5％的交叉反应，与其 他重金属离子的交叉反应均小于 1％。结论：铅离子多克隆抗体制备成功。 关键词 ：铅离子；合成抗原；ELISA；多克隆抗体 PreparationandIdentificationofAnti--Lead--chelateComplexPolyclonalAn tibody ZHAIYi—fan，XIANGJun-jian，，TANGYong，GUOChang—wei。，LIUXiao—feng，YANGHong-yu (1．AntibodyEngineeringCenter，JinanUniversity，Guangzhou 510632，China； 2．GuangzhouRiversEnterpriseCo．Ltd．，Guangzhou 510632，China) Abstract：Objective：BASandOVAwereindividuallyconjugatedwithlead—chelatecomplex(Pb—DTPA)toprepare2antigens， namelyPb—DTPA—BSA，immunogenandPb—DTPA·OVA，detectivenatigen．Thesynthesizedantigenswerethenusedto immunizeBALB／cmiceforpreparingpolyclonalnatibodies．Finally，thenatiserawihtdrawnfrom immunizedBALB／cmice wereassessde ofrhteirtitersandspecificities．Mehtods：TheartificialnatigenswereidentifiedbySDSandscannde wiht ultravioletspectrophotometer．ThePb concenrtationsofhtesynhtesizedantigensweredeterminedusinginductivelycouplde plasma(ICP)spcetrophotometer．IndirectELISAandcompetitiveELISAwereusedtodetermineantiserumtiterandspceificity， respectively．Results：Comparedwiht carrierproteins，htesynhtesizedna tigensexhibitedlaggedproteinbandsinSDS—PAGE pa~em andblueshiftofUVabsorptionpeaks．Th enatiserum titersofthefourthandfifthmicereachde upto1：400，000wihtout CROS