百令拮抗环孢素A肾毒性的研究.ppt

百令拮抗环孢素A肾毒性的研究 概 述 随着器官移植手术的成熟和新型免疫抑制剂的开发,器官移植的早期成功率得到明显提高。 CsA的应用使器官移植的急性排斥发生率明显降低,然而其毒性作用限制了它在慢性排斥中的长期应用,防治CsA毒性的药物学研究具有重要意义。 Causes of graft loss over 10 years in CsA-treated patients * 肾脏及全身的血管收缩 * 内皮素的释放增加 * NO的产生减少 * TGF-?的表达增加 是导致慢性环孢素中毒及间质性纤维化的主要细胞因子 体内及体外实验均证实环孢霉素可以带来TGF-?1基因表 达?,环孢素的剂量与肾内TGF-?增加的程度成正比。 抗TGF-?1的抗体可以减轻或阻断TGF-?1的致纤维化作用（Khanna 1999） TGF-?拮抗剂（Pirfenidone ）可以保护肾脏免受环孢 素的毒性（Shihab2001）。TGF-?1的mRNA可以明显减少。 以往的研究曾证实冬虫夏草能防治环孢A的肾毒性，促进小管上皮细胞增生，提高肌酐清除率，减轻肾小管的萎缩及空泡变性。 一、体外试验部分 1.百令对体外培养的肾小管上皮细胞3H掺入的影响； 2.环孢霉素与百令对体外培养的肾小管上皮细胞周期的作用； 3.环孢霉素对体外培养的血管内皮细胞TGF-β mRNA表达的影响。 1. 3H掺入结果 不同剂量（0.32~200 μg/ml )百令作用后肾小管细胞3H掺入量 各组与对照组相比较 *:P0.05;**:P0.01 1. 3H掺入结果 经过重复验证，得到相同的结果: 百令200 μg/ml剂量组有非常显著的促进肾小管上皮细胞3H 掺入的作用; 40μg/ml和8μg/ml有显著的促进3H 掺入的作用， 表明百令具有促进肾小管上皮细胞增殖的功能。 2.细胞周期作用的结果 15 μg/ml环孢霉素和不同剂量百令对HKC细胞周期的作用 *:P0.05, **:P0.01 versus CsA组 15μg/mlCsA作用24小时对HKC细胞周期有非常明显的影响，与对照组相比G2/M期细胞比例明显上升，S期细胞显著减少（t检验P值均0.01)。 15μg/mlCsA＋50μg/ml百令组及15μg/mlCsA＋100μg/ml百令组作用24小时与CsA组相比较S期 细胞比例上升，G2/M期细胞比例下降,差异显著。 3.环孢霉素对体外培养的血管内皮细胞TGF-β mRNA表达的影响 大鼠动物模型研究发现，CsA诱导的血管病变可能与TGF-β 的表达密切相关，在小动脉透明样变的病变位置TGF-β表达特别高。 百令及其提取液能降低小血管透明样变性的发生率，同时抑制TGF-β 在小血管的表达。 初步结果 不同剂量环孢霉素对体外培养的血管内皮细胞TGF-β 表达的影响（以管家基因GAPDH校正） 小 结 体外研究结果表明: 百令能促进肾小管上皮细胞增殖，逆转CsA引起的肾小管上皮细胞细胞周期阻滞，可能是百令防治CsA肾毒性作用的机制之一。 初步研究还发现，相当于体内药物浓度的环孢霉素可促进体外培养的HUVEC细胞表达TGF-β mRNA ，为进一步的研究提供了依据。 二、大鼠体内试验部分 模型制作： CsA 25mg/kg.d 皮下注射? 4周 百令治疗：?百令1.5g/ kg.d ,口服4周 ?百令提取液1.5g/ kg.d口服4周 观察时间：4周 百令对CsA诱导入球小动脉TGFbeta表达的影响 百令对CsA诱导入球小动脉TGFbeta表达的影响 百令对CsA诱导球囊壁FN表达的影响 CsA诱导的小管空泡变性 CsA诱导的血管坏死 百令用药后小管病变改善(再生) 百令用药后小管出现再生现象和血管病变改善 结 论 体内及体外试验均证明: 百令能有效减轻环孢霉素的肾毒性，其作用包括： 1.促进肾小管上皮细胞的增殖、修复 2.逆转环孢素引起的肾小管上皮细胞生长抑制 3.防止环孢素用药后引起的血清肌酐升高 4.减少环孢素中毒引起的肾小管细胞空泡变性和 细胞坏死，减少间质炎症及纤维化。 5.抑制环孢中毒后引起的TGF-?表达增加，减少 纤维连接蛋白在球囊壁和血管的沉积。 冬虫夏草拮抗细胞外基质蓄积的实验研究 认为百令及其提出液有拮抗马兜铃酸毒性所致的细胞外基质蓄积引起肾小管间质病变的作用 北京中日友好医院 中华医学会肾脏病学分会2005年学术年会 FTY720 在肾移植的应用研究