Bacillus+spYX中温酸性α淀粉酶的分离纯化及其酶学性质研讨.pdfVIP

发酵工程学科的进展 ——第四次全国发酵工程学术讨论会论文集 Bacillus sp．YX中温酸性a-淀粉酶的分离纯化 ． 及其酶学性质研究 刘旭东，徐 岩 -(江南大学生物工程学院-F业生物技术教育部重点实验室，无锡814036) 摘要：近年来，伴随淀粉质原料深加工工业的不断发展，开发筛选具有各种特性的r淀粉 酶成为目前酶制剂研究领域的一个重要方向．酸性r淀粉酶以其独特的耐酸特性引起科研 者的兴趣．本文从Bacillussp．YX中分离纯化了一种酸性r淀粉酶，并对酶学性质进行了 Fast 研究．粗酶经硫酸铵沉淀、DEAE-SepharoseFlow阴离子层析、SephadexG一150凝胶 过滤层析等步骤后获得电泳均一的酸性r淀粉酶，其分子量约为56kDa．该酶最适反应pH 酶活性保留80％以上，具有一定的耐酸特性．最适反应温度为40～50℃，在60℃保温1h残 留60％活力．该酶在pH4．0的酸性条件下水解淀粉底物快速高效，生成的还原糖占初始干 物质总量的53％f在pH5．0的条件下，该酶对于多种生淀粉底物也有良好的水解作用．因 此，该酶是一种具有研究价值和应用前景的酸性r淀粉酶。 关键词：r淀粉酶 目前，淀粉质原料的液化和糖化过程中，控制好浆料的pH值非常重要。通常淀粉浆 下酶活性很低，同时，糖化酶的最适pH值为4．2--,5．0，所以需要来回调整pH值。由于 pH值的调整，增大了酸碱试剂的消耗，提高了浆液中的离子强度，另外还容易产生龙胆 二糖等副产物。因此，酸性口-淀粉酶的开发和应用势在必行。 自从日本学者在1963年发现了产自Aspergillusniger的酸性a一淀粉酶以来，很多 国家都开展了酸性a一淀粉酶的研究[1’2]。伴随着一些耐热极端微生物的分离培养，陆续 上；而最适温度在40-～60℃的中温酸性r淀粉酶的研究报道目前并不多见。由于高温酸 性口-淀粉酶在应用过程中，需要消耗大量的热能，增加了操作成本；同时，高温旷淀粉酶 的灭活也使得操作工艺变得复杂。因此，中温酸性旷淀粉酶的开发研究具有重要的现实 意义，可以广泛应用在青贮饲料、啤酒酿造、饮料除浊、纺织退浆、酒糟处理等行业。 本实验室从淀粉厂酸性土壤中分离筛选到一株产酸性a一淀粉酶的野生菌株YX。此 菌株具有较高的产酶量。本文就此菌株产生的酸性旷淀粉酶的纯化和性质进行了研究。 1 材料与力法 1．1材料 1．1．1菌种：由本实验室从淀粉厂酸性土壤中分离得到产酶菌株Bacillussp．YX。 678 第四次全国发酵工程学术讨论会 1．1．2培养基： 种子培养基(％)如下：可溶性淀粉lOg，蛋白胨109，酵母膏59，NaCl109，MgS04· 7H200．59，KH2POl39，CaCI20．59，FeS04·7H200．Ig，用盐酸调pH为4．5，定容至 0．59， 1L；发酵培养基(％)如下：可溶性淀粉59，蛋白胨59，玉米浆209，MgSO。·7H20 KH2POt 0．59，FeSOl·7H20 39，CaCl2 0．19，用盐酸调pH为4．5，定容至1L。 1．2方法 1．2．1培养方法 后，按接种量4％接种于装液量10％的250mi摇瓶中，45℃、150r／min培养48h。 1．2．2酶活性测定 参照日本专利[6]中所使用的测定酸性a一淀粉酶活性的方法。 1．2．3酶的分离纯化 Fast 液。将透析样品上样到DEAE—Sepharose 洗脱至A2蚰不变，再用含0．imol／L 收集的样品进行活性测定，合并活性组分，透析后冻干浓缩。冻千的酶粉用缓冲液A复 溶，进行sephadexG一150凝胶过滤层析分离(1．6cm×60cm)，用含0．2mol／LNaCl的 缓冲液A进行洗脱，流速为0．3mL／min。将收