宫颈癌患者与宫颈息肉蛋白质谱的差异分析.docVIP

精品论文 参考文献 宫颈癌患者与宫颈息肉蛋白质谱的差异分析 韩云炜 范娟 吴敬波 韩新平 王开正 李宗衡 唐学清（泸州医学院附属医院肿瘤科 四川泸州 646000） 【中图分类号】R737．9【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）15-0042-03 【摘要】目的 探索宫颈癌患者与宫颈息肉的血清蛋白质谱差异， 初步探讨其用于宫颈癌诊断的临床价值。方法 收集73例宫颈癌患者和39例宫颈息肉的血清标本，随机分为训练组(56例宫颈癌和20例健康人)与测试组(17例宫颈癌和19例健康对照)。采用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF MS)技术检测所有血清标本的蛋白质谱。用Biomarker Wizard统计软件比较训练组宫颈癌与宫颈息肉对照间的蛋白质谱差异，再用Biomarker Pattern软件筛选出一组差异蛋白构建决策分类树模型以鉴别宫颈癌病例和宫颈息肉病例，最后用测试组对分类模型进行验证。结果 宫颈癌患者和对照组血清蛋白指纹图谱共有148个明显表达差异的蛋白峰，筛选质荷比(m／z)为2957、2974、2982、3016、3282、5928、5948、6647、6661的9个蛋白质峰作为标志蛋白(Plt;0.01)建立人工神经网络诊断模型，利用该模型对宫颈癌癌进行盲法预测，结果表明该诊断模型检测宫颈癌的灵敏度为94．2％，特异度为91.3％。结论 宫颈癌与宫颈息肉人群的血清蛋白质谱存在差异，SELDI-TOF -MS技术筛选出的血清差异蛋白有助于宫颈癌的早期鉴别诊断。 【关键词】宫颈肿瘤 蛋白质组学 表面增强激光解析离子化飞行时间质谱 血清 诊断 宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，在全球女性恶性肿瘤中其发病率仅次于宫颈癌，在发展中国家则居首位。统计数据显示，每年全世界范围内宫颈癌新增病例大约49.3万，死亡病例约27.4万，其中80％分布在发展中国家[1]。我国每年新增宫颈癌病例约13万，占全球宫颈癌病例的1/4以上[2]。随着宫颈癌筛查工作的开展，世界范围内宫颈癌发病率普遍下降，但是卫生条件差和经济落后地区宫颈癌发病率仍高于世界平均水平，同时宫颈癌患者年轻化的趋势不容忽视。目前仍没有理想的肿瘤标志物用于宫颈癌的早期诊断，蛋白质组学研究则使实现宫颈癌早期肿瘤标志物的筛查成为可能[3]。为了探索宫颈癌与宫颈息肉的血清蛋白质谱差异，本研究采用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF MS)技术检测了宫颈癌与宫颈息肉的血清蛋白质谱，比较两组的差异，并筛选差异蛋白构建分类模型，以帮助鉴别宫颈癌患者与 。 1 对象与方法 1.1 研究对象 血清标本在患者入院后未进行任何治疗时采集。来自2010年04月至2011年6月泸州医学院附属医院肿瘤科的宫颈癌患者，均得到病理检查确诊并获得患者的知情同意。共73例，年龄25-78岁，平均年龄46.6岁，中位年龄47岁。中低分化鳞癌46例，高分化鳞癌21例；腺癌6例；临床分期ⅡA期 24例，ⅡB期38例ⅢA期11例(FIGO分期）；所有病例均经临床检查排除重要脏器(心、肺、肝、肾等)疾病。宫颈息肉健康对照组39例血清标本来自 志愿者(均签知情同意书)，年龄23～68岁，平均年龄为46.1岁，中位年龄45岁。 1.2 仪器、软件和试剂 美国Sigma公司提供的尿素、乙酸钠、CHAPS(3-环乙胺-1-丙磺酸)、DTT(二硫代苏糖醇)等，美国Ciphergen公司提供的PBSⅡ/C型蛋白质指纹图谱仪、CM10芯片(弱阳离子交换表面芯片)、蛋白质芯片数据采集软件(Protein software)。 1.3 方法 1.3.1 收集处理标本 清晨采集受试者空腹静脉血3ml，30min内放于3000r/min离心5min，将分离的血清转入Eppendof管，再次4℃3000r/min离心5min，血清分装50mu;l每管，冻存于-80℃ 冰箱中备用。另取l0份正常人血清各0.5ml进行混合，制成混合对照血清，分装后-80℃保存。 1.3.2 制备样品混合液 取96孔细胞培养板，每孔加入10mu;lU9缓冲液(9MUrea，2％CHAPS，1％DTT)。将冻存血清置于冰上融解后4℃ 10000r/min离心2min，分出血清加入上述培养板中，每孔5mu;l，4℃600r/min振荡30min。加入185mu;l结合缓冲液(50mmol/LNaAC，pH4.0)，立即混匀。 1.3.3 上样及洗脱 将弱阳离子交换表面芯片(CM10，美国Cipher.g