pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2真核表达载体的构建与鉴定.pdfVIP

· 46 · 中国血吸虫病防治杂志 2014年第26卷第1期 ChinJSchistoControl2014,Vol.26,No.1 ［［文章编号文章编号］］）0101⁃⁃0505 ··论著论著·· pcDNApcDNA33⁃⁃HBsAgHBsAg⁃⁃pp3030⁃⁃ROPROP22真核表达真核表达 载体的构建与鉴定载体的构建与鉴定 1,2 3 3 1 1 1 1 4 1 魏庆宽 ，王英婷 ，闫运琴 ，肖婷 ，李瑾 ，徐超 ，刘功振 ，刘娟美 ，仲维霞 ， 1 1 1 1* 尹昆 ，付斌 ，闫歌 ，黄炳成 ［［摘要摘要］］ 目的目的 构建pcDNA3⁃HBsAg⁃p30⁃ROP2多基因重组表达载体，并对其进行初步鉴定。方法方法 根据重组体pcDNA3⁃ p30⁃ROP2酶切位点和乙型肝炎表面抗原（HBsAg）基因序列等因素设计合成引物，扩增HBsAg目的基因片段，再应用酶切、 连接等分子生物学技术将HBsAg目的基因克隆至pcDNA3⁃p30⁃ROP2表达载体中。应用聚合酶链反应（PCR）初筛，再采用 酶切、测序等技术对构建的重组表达载体pcDNA3⁃HBsAg⁃p30⁃ROP2进行鉴定。结果结果 PCR扩增出HBsAg基因片段，构建 了pcDNA3⁃HBsAg⁃p30⁃ROP2多基因真核表达载体。PCR与酶切结果显示，该基因片段大小均与理论值相符；测序结果显 示该重组表达载体包含了p30⁃ROP2和HBsAg目的基因的完整序列。结论结论 成功构建了多基因重组表达载体pcDNA3⁃ HBsAg⁃p30⁃ROP2，为进一步研究多基因核酸疫苗奠定了基础。 ［［关键词关键词］］ 弓形虫；表面抗原1（p30）；棒状体分泌抗原2（ROP2）；乙肝表面抗原；基因重组 ［［中图分类号中图分类号］］ RR382382..55 ［［文献标识码文献标识码］］ AA ConstructionandidentificationofpcDNA3⁃HBsAg⁃p30⁃ROP2expressionvec⁃ tor 1，2 3 3 1 1 1 4 1 WEIQing⁃kuan ，WANGYing⁃ting ，YANYun⁃qin ，XIAO Ting ，LIJin ，XU Chao ，LIU Gong⁃zhen ，ZHONG Wei⁃xia ，YIN 1 1 1* Kun，FUBin ，YANGe ，HUANGBing⁃cheng 1ShandongAcademy of Medical Sciences，Shandong Institute of Parasitic Diseases，ShandongAcademy of Medical Science Key Laboratory ofMolecular Immunology ofParasiticDiseases，ShandongProvince，Jining 272033，China；2School ofMedicine and LifeSciences，UniversityofJinan⁃SandongAcademy ofMedicalSciences，ShandongProvince，China；3FirstPeople’sHospitalof Jining，ShandongProvince，China；4ShandongDaizhuangHospi