当归总黄酮提取工艺及体外抗氧化性研究.docVIP

当归总黄酮提取工艺及体外抗氧化性研究 当 sinensis(Oliv.)Diels的干燥根….当归根人药,有补血活血, 调经止痛,润肠通便和调控免疫活性的功效【21.临床用量 大,出口量大,主产甘肃岷县,渭源,陇西,宕昌等地I.其 主要成分有挥发油,多糖,阿魏酸等}41,此外还含少量钾, 钙,镁,锌,硒等微量元素.近年来,对当归的深度开发在 医药,保健品和化妆品领域取得了一定成效….当归的主 要功能成分一直被认为是挥发油和阿魏酸,近年来国内外 医学专家研究发现当归还有抗缺氧,抗癌,康肤美容,补 血活血,抑菌,抗动脉硬化作用等I51. 黄酮是广泛存在于自然界的一大类化合物,存在于植 物的所有部分,包括根,心材,树皮,叶,果实和花中.其在 植物体内大部分与糖结合成苷类,小部分以游离态(苷元) 的形式存在【.黄酮类化合物大多具有颜色,在生理方面 具有降低心肌耗氧量,增加冠状动脉和脑血管血流量,增 加机体免疫功能,抗心律失常,软化血管,降血糖,降血 脂,清除机体自由基和抗衰老等作用I7I.笔者等以甘肃陇 南当归为对象,考察其提取工艺及抗氧化性,为当归的进 一 步开发利用提供科学依据. 1材料与方法 1.1原料及处理方法 当归:采自甘肃陇南.将当归根经自来水,蒸馏水洗 净,烘干,粉碎过60目筛,备用. 1-2主要试剂 邻苯三酚:美国Sigma公司;Tris:加拿大BioBasic公 酸,30%过氧化氢,i氯乙酸(TCA),磷酸缓冲液(pH值为 7.40,pH值为6.60)(PBS),无水乙醇,亚硝酸钠,硝酸铝, 氢氧化钠,三氯化铁,铁氰化钾等试剂均为分析纯;试验用 水为三蒸水,所用仪器均经自来水,三蒸水清洗备用. 1.3主要仪器 GB204电子天平:梅特勒一托利多仪器(上海)有限公 司;RE一52C型旋转蒸发仪:巩义市英峪予华仪器厂; SHZ—D(1lI)循环水式真空泵:巩义市予华仪器有限责任公 司;DK一98一型电热恒温水浴锅:天津市泰斯特仪器有限 公司;WFJ一2100型分光光度计:尤尼柯(上海)仪器有限公 司;Lambda系列紫外/可见分光光度计:美国PerkinElmer 公司;800型离心沉淀器:上海手术器械十厂;YLD一2100 电热恒温鼓风干燥箱:上海琅歼实验设备有限公司. 1.4黄酮含量测定原理及鉴定方法 1.4.1测定原理黄酮类化合物主要包括黄酮苷和黄酮 醇苷两大部分.在黄酮类化合物溶液中加入铝离子试剂 后,黄酮类化合物中的酚羟基与Al生成络合物,控制适 宜的pH值,所生成的络合物在可见区能获得特征吸收 峰,其质量浓度与吸光度符合朗伯一比耳定律,可以定量 测定『8]. 1.4.2金属盐类试剂的络合反应盐酸一锌粉反应:在 样品液中加入少量锌粉,再滴加1-2滴浓盐酸,在沸水中 加热3min,观察反应结果.铝盐反应:在样品液中滴加 10%A1C1,溶液,观察反应结果.浓硫酸反应:在样品液中 滴加少量浓H2SO溶液,观察反应结果.硝酸铅反应:在样 品液中滴加10%Pb(NO,),溶液,观察反应结果.氢氧化钠 反应:在样品液中滴加4%NaOH溶液,观察反应结果. 1.4.3单因素试验分别以提取温度,乙醇浓度,提取时 间,料液比为影响因素,设置4个因素的不同水平,以确定 相关因素对当归提取液中总黄酮含量的影响. 调 查 研 究 1.5.2标准曲线的绘制 1.5.2.1芦丁标准溶液的配制准确称取105oC常压干燥至 恒重的芦丁标准品10.0mg,用少量75%乙醇加热溶解,待 冷却后转移至50mL的容量瓶中,定容至刻度,充分混匀.芦 丁标准品的浓度为0.2000rag/mE,备用. 1.5.2.2测定波长的选择按上述方法制备标准溶液,以不 加标准溶液的相应溶液为空白,在波长400—760nm进行连 续扫描.结果在波长509nm处有最大吸收,因此选择509nm 为测定波长. 1.5.2.3标准曲线的绘制精确吸取芦丁标准溶液0.O0, 0.50,1.O0,1.50,2.O0,2.50,3.O0,3.50mL,分别置于10mL的具 塞试管中,先加5%亚硝酸钠溶液0.40mL,摇匀,静置6min; 再加10%硝酸铝溶液0.40mL,摇匀,静置5rain;最后加入 4%氢氧化钠4.O0mL,用75%乙醇定容,摇匀,静置15rain, 以芦丁试剂空白作参比,用分光光度计于509nrfl处测定吸 光度. 1.5.3回收率试验精密量取一定量在最佳提取工艺条件 下的当归总黄酮提取液,加入0.2000mg/mL芦丁标准液 1.O0mL,最后定容至10mL.测量吸光度,计算黄酮回收率. 1.5.4精密度试验根据正交试验的分析结果,依照最佳提 取工艺进行提取,对当归样品平行提取5次,测定黄酮含量, 计算精密度. 1.6体外抗氧化性试验 1.6.I提取液对羟基