HPLC法测定荭草中齐墩果酸的含量.docVIP

精品论文 参考文献 HPLC法测定荭草中齐墩果酸的含量 胡明霞（仙桃市中医院 湖北仙桃 433000） 【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）26-0273-02 【摘要】目的 建立荭草中齐墩果酸的定量分析方法。方法 采用高效液相色谱法定量齐墩果酸，色谱柱：KromasilC18反相柱（5micro;mtimes;250mmtimes;4.6mm），流动相：乙腈-磷酸水溶液（75∶25），柱温为35℃，流速：1.0ml/min，检测波长：210nm。结果 HPLC法测定结果显示，色谱峰形好，分离度高。齐墩果酸在0.4～10micro;g（r＝1）呈良好的线性关系；供试品在48h内稳定（RSD＝1.01％）；该方法精密度高（RSD＝1.10％），重复性良好（RSD＝0.88％），平均加样回收率为101.31%（RSD%=2.11%）。结论 所建立的方法适合作为荭草的含量测定方法。 【关键词】荭草 HPLC 齐墩果酸 荭草为蓼科植物红草Polygonum orientale L.的干燥果穗及带叶茎枝，具有清热解毒，祛风除湿，活血消肿功能，临床上多用于风湿性关节炎和冠心病，为贵州少数民族用药。国内外关于荭草中化学成分研究报道为数甚多，主要集中在黄酮类及其指纹图谱的研究上[1]，却没有学者对其四环三萜类成分进行分析。因此，为更全面地反映荭草的功效，本文利用高效液相色谱法（HPLC）对荭草药材花类部分中含有的活性单体齐墩果酸进行了分析[2]。该方法操作简便、重现性好、灵敏度高，结果科学准确，适合作为该中药材中齐墩果酸的含量测定方法。具体研究如下。 1 仪器与试药 高效液相色谱仪（美国Agilent公司/Agilent1200系列），电子天平（Sartorius BP211D），超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，250W/40kHz）；荭草（批号20111123产地：贵州，购于东莞市国药有限公司）；齐墩果酸对照品（来源：中检所，批号：110709-200304）；乙睛为色谱纯（美国Fisher公司），其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18反相柱（5micro;mtimes;250mmtimes;4.6mm）；流动相为乙腈-磷酸水溶液（75∶25）；流速为1.0ml/min；柱温为35℃；检测波长为210nm；进样量为20micro;L。在此条件下，理论塔板数按齐墩果酸峰计算不得低于3000，齐墩果酸峰与相邻的其他峰的分离度应大于2.0。 2.2 对照品溶液的制备 取齐墩果酸对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 2.3 供试品溶液的制备 取样品适量，粉碎，过3号筛；取粉末约1.0g，精密称定，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入5%盐酸溶液25ml，密塞，精密称定，加热回流1小时，放冷，再精密称定，用5%盐酸溶液补足减失重量，滤过，取续滤液，即得。 2.4 线性关系考察 分别精密吸取同一份对照品溶液（每1ml约含齐墩果酸 0.2mg）2.5.10.20、50micro;l，照2.1项下色谱条件测定，分别以齐墩果酸进样质量、峰面积为横坐标和纵坐标，求得回归方程为y＝356.12x-0.7535，相关系数r＝1。结果表明，齐墩果酸在0.4～10micro;g的范围内时与峰面积有良好的线性关系。 2.5 稳定性试验 取同一批样品（批号，依法制备后分别在0、3.6.12.24.48小时测定齐墩果酸的含量。结果发现供试品溶液在48小时内稳定（RSD%=1.01%）。 2.6 重复性试验 取同一批样品（批号依法平行制备6份，测定齐墩果酸的含量。结果齐墩果酸平均含量为3.6mg/g（RSD%=0.88％），表明该方法重复性良好。 2.7 加样回收率试验 取同一批已知含量的样品（批号含量：3.6mg/g）6份，每份取约0.5g，精密称定，分别精密加入齐墩果酸对照品1.8mg，按2.3项下的供试品溶液制备方法和2.1项下的色谱条件测定。结果 6份样品平均加样回收率为101.31%（RSD%=2.11%），表明该方法准确度高。 2.8 样品测定 分别精密称取3个批号的荭草样品约1.0g，按2.3项下方法制备供试品溶液，照2.1项下的色谱条件对齐墩果酸进行含量测定。结果如下：3.3mg/g（批号：2011