HPLC法测定中药材土牛膝中β-蜕皮甾酮的含量.docVIP

精品论文 参考文献 HPLC法测定中药材土牛膝中β-蜕皮甾酮的含量 支荣荣 　　（江苏省盐城市药品检验所 224002） 　　【摘要】在《江苏省中药材标准》（1989年版）修订之际，研究HPLC法测定土牛膝中主成分beta;-蜕皮甾酮，作为该标准修订参考。 　　【关键词】HPLC 土牛膝 beta;-蜕皮甾酮 　　【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）23-0369-02 　　牛膝为苋科（Amaranthaceae）植物牛膝Achyranthes bidentata Bl.的干燥根及根茎，土牛膝为其野生品。李时珍谓：“牛膝处处有之，谓之土牛膝。[1]野生于山坡、田野、路旁。分布于陕西、甘肃、安徽、江西、福建、江苏等地。[2]牛膝中含有植物变态激素类，其中beta;-蜕皮甾酮(Ecdysterone)为其主要活性成分。[3]还含有皂苷、粘液质及无机盐等。皂苷主要有二齿皂苷（bidentatoside）Ⅰ[4]。该品种收载于《江苏省中药材标准》（1989年版），由于该标准执行时间较久，已不能全面地控制土牛膝的质量，为完善该标准，我们对土牛膝的质量标准进行了研究。研究了主成分beta;-蜕皮甾酮HPLC测定方法，供该标准修订参考。 　　1 仪器与试药 　　1.1仪器 Agilent1260高效液相色谱仪（美国安捷伦）；BP211D电子天平（德国Sartorius）；BT224S电子天平（德国Sartorius）。 　　1.2试药 beta;-蜕皮甾酮对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111638-200603）；甲醇、乙腈（江苏汉邦科技有限公司，色谱纯）；水（超纯水）等；其它试剂均为分析纯。土牛膝样品为10批次，采、购自江苏各地。 　　2 实验方法与结果 　　2.1对照品溶液的制备 　　以甲醇制备beta;-蜕皮甾酮的溶液（105.6mu;g/ml）。 　　2.2供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水饱和正丁醇30ml，密塞，浸泡过夜，超声处理(功率300W，频率40kHz) 30分钟，滤过，用甲醇10ml分数次洗涤容器及残渣，合并滤液和洗液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 　　2.3色谱条件 色谱柱为Capcell C18 柱(4.6mmtimes;150mm,5mu;m)；以乙腈-水-甲酸(16：84：0.1)为流动相；检测波长为250nm。柱温为30℃；流速为1.0ml/mlm；进样量均为10mu;l。在该色谱条件下，beta;-蜕皮甾酮可达到基线分离，其它成分对测定无干扰。（图1） 　　图1土牛膝含量测定高效液相色谱图 　　A 供试品溶液，B 对照品溶液，C 空白溶剂 　　2.4线性关系考察 　　精密量取对照品溶液（105.6mu;g/ml）0.2ml、0.5ml、1ml、2ml、4ml分别加入到10ml的量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀得对照品工作液系列。分别吸取10mu;l进样，测定峰面积。以峰面积Y为纵坐标，对照品的质量X（mu;g）为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程：Y=1.001times;104X-8.938，R2=0.9998；beta;-蜕皮甾酮在0.02112mu;g-0.4224mu;g范围内与峰面积呈良好的线性关系。 　　2.5精密度试验 　　精密吸取对照品溶液（105.6mu;g/ml），连续进样6次，对照品溶液峰面积的RSD为0.2%，结果表明精密度良好。 　　2.6稳定性考察 　　取同一供试品溶液，分别于0，6，12，24，48h分别进样10mu;l，按上述条件测定峰面积，RSD为0.5%（n=5)，结果表明供试品溶液在48h内稳定。 　　2.7重复性试验 精密称取同一样品，按供试品溶液制备方法平行制备6份，依次测定，计算得beta;-蜕皮甾酮的含量，RSD为1.7%，结果表明重复性良好。 　　2.8加样回收率试验 　　精密称取已知含量的样品（平均含量0.5426mg/g）0.5g，六份，分别精密吸取105.6mu;g/ml的对照品溶液3ml(即0.3168mg)，依法值得供试品溶液。分别吸取上述溶液各10mu;l测定回收率，平均回收率为98.4%，回收率良好。 　　2.9样品测定及限度拟定 　　依2.2方法测定10批样品，结果按干燥品计算，含beta;-蜕皮甾酮（C27H44O7）平均值为0.050％，以平均值80%设限，故规定本品按干燥品计算，含beta;-蜕皮甾酮（C27H44O7）不得少于0.040％。 　　3 讨论 　　3.1供试品提取方法