第三节 体外受精技术.ppt

* * 第三节 体外受精技术 体外受精技术（IVF）：把成熟卵母细胞或未成熟卵母细胞经体外成熟（IVM）培养后，与体内或体外获能的精子在体外条件下完成受精的过程。又称IVF——ET。 应用于动物生殖机理研究，畜牧生产，医学和濒危动物的保护等。 1978年7月25日世界首例试管婴儿 1988年3月10日我国首例试管婴儿 1992年我国首例三胞胎试管婴儿 母体细胞的获取 卵母细胞的成熟培养 新鲜或冷冻的精子 体外精子获能 获能精子 体外受精 成熟的卵母细胞 体外受精胚的培养 体外受精技术流程图 母体细胞的获取 无菌离体采集卵巢，放入25℃―35℃灭菌生理盐水PBS保温瓶中，3h内带回实验室再处理。 处理方法：卵泡抽吸法、卵巢切割法 卵母细 胞的 离体采集 卵母细胞的 活体 采集 动物经超排处理后，用剖腹术、腹腔镜技术或B型超声波法等在活体动物上直接采集卵泡卵母细胞。 牛卵巢 B型超声波法： 借助超声波探头和屏幕的引导，从活母畜卵巢采集卵母细胞。 操作员先将带有超声波探头和采卵针的采卵器通过阴道插入子宫，同时通过将卵巢贴在探头上。根据B超屏幕所显示的卵泡位置，利用采卵针穿刺卵泡并同时抽吸卵母细胞。 活体采集的牛卵母细胞 返回 卵母细胞的成熟培养 采集的卵母细胞绝大多数是卵丘—卵母细胞复合物（COC）。 COC的要求：卵母细胞形态规则，细胞质均匀，卵母细胞不能发黑或透明，外围有多层卵丘细胞紧密包围。 根据COC的完整程度可以把未成熟卵母细胞分为四个等级： A级 卵母细胞质均匀，有三层以上卵丘细胞紧密包围 B级细胞质均匀，卵丘细胞少于三层或只有部分包围卵母细胞 C 级 卵母细胞裸露 D级 卵母细胞死亡和退化 卵母细胞的成熟培养 卵母细胞的成熟培养系统的分类： 一、开放培养系统 二、微滴培养系统 三、密闭培养系统 返回 每一种基础培养液中要加一定浓度的血清和促性腺激素，提高受精率和胚胎发育率。 卵母细胞的成熟培养：CO2培养箱 CO2培养箱 精子获能技术 哺乳动物的精子必须在子宫或输卵管内存留一段时间，发生一定的生理变化才能获得受精能力，将此种现象成为精子活能。 任何导致精子质膜稳定性下降和Ca2+内流的因素都可能使精子获能 精子获能的方法有： 1、血清白蛋白法 2、高渗盐法 3、卵泡液孕育法 4、Ca2+载体法 5、肝素法 精子获能技术 精子获能的特征： 超活化运动：由于代谢活动增强使得运动方式改变。 顶体反应：获能精子头部的去能因子被去除，头部质膜形态发生改变，同时顶体内酶被激活。 *