应用头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌结果分析.docVIP

精品论文 参考文献 应用头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌结果分析 魏峰 　　（南阳市第二人民医院检验科 河南 南阳 473012） 　　【摘要】 目的：分析头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌的结果，评价其临床价值。方法：对分离所得的218株葡萄球菌进行mecA基因的检测，对比头孢西丁纸片扩散法与苯唑西林纸片扩散法的应用效果。结果：苯唑西林纸片扩散法结果与mecA结果符合率为96.3%，而头孢西丁纸片扩散法结果为99.43%。在CNS的检测结果上，头孢西丁在特异性与敏感性（100%、94.6%）上均高于苯唑西林（95.9%、88.2%），具有统计学意义（P＜0.05）。结论：头孢西丁纸片扩散法对耐甲氧西林葡萄球菌的灵敏度较高，检测结果与PCR检测结果相关性高，且操作简便，可在临床应用上推广。 　　【关键词】 头孢西丁；耐甲氧西林葡萄球菌；mecA基因；苯唑西林 　　【中图分类号】R37 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）15-0150-02 　　MRS是重要感染病原菌，其耐药性的产生主要是与mecA基因的控制编码产生的PBP2a（青霉素结合蛋白）有关，从而导致出现青霉素的耐药性，主要有效的抗生素为万古霉素[1]。但因MRS的基因突变使万古霉素对其敏感性大幅度降低，因此，临床应用上如何快速有效的检测出MRSA是治疗过程中的关键。本文以mecA基因检测法结果为标准，比较苯唑西林纸片扩散法与头孢西丁纸片扩散法对MRS的检测结果，取得了较为满意的结果，现具体报告如下。 　　1.资料与方法 　　1.1 一般方法 　　218株耐甲氧西林葡萄球菌均由我院自2014年10月份至2015年9月份于就诊人群中采集，标本来源如下：142株为痰液、38株为分泌物、15株为分泌物、14株为脓液、9株为咽拭子。经API STAPH系统鉴定，葡萄球菌的分类如下：78株为金黄色葡萄球菌、47株为溶血葡萄球菌、52株为表皮葡萄球菌、11株为腐生葡萄球菌、7株为模仿葡萄球菌、8株为里昂葡萄球菌、5株为松鼠葡萄球菌、5株为赛氏葡萄球菌、2株为人葡萄球菌、3株为缓慢葡萄球菌。金黄色葡萄球菌A TCC29213与A TCC25923为质控菌株。 　　1.2 试剂与仪器 　　离心机、零下80℃冰箱、PCR扩增仪、由英国OXOID生产的苯唑西林纸片（规格为每片1mu;g）、头孢西丁纸片（规格为每片30mu;g）、由杭州天和微生物试剂公司生产的水解酪蛋白( M-H)琼脂、生物梅里埃公司生产的金黄色葡萄球菌乳胶凝集试剂、PCR引物序列为5prime;-GGT TAC GGA CAA G GTG AAA TAC TGA-3prime;、5prime;-AGT TCT GCA GTA CCG GAT TTG C -3prime;，扩增时mecA作为靶基因，最终所得片段为533bp。 　　1.3 方法 　　1.3.1 PCR检测mecA基因 首先提取模板，再将DNA提取液加入PCR反应体系中，在93℃下预变性，时长为2分钟，在93℃（60s）、55℃（60s）、72℃（60s）的循环条件下循环35次，结束后在72℃下延伸2分钟。对照时，以金黄色葡萄球菌A TCC29213为准，出现相对分子质量为533bp的阳性模板时视为阳性。 　　1.3.2纸片扩散法 以美国临床实验室标准化协会（NCCLS）制定的相关标准为准，在生理盐水中置入18～24h的单个纯菌落，制成菌悬液，并涂在M-H培养基的表面上，贴上1mu;g的苯唑西林与30mu;g的头孢西丁的纸片，在35℃条件下培养24小时。 　　1.4 评定标准 　　金黄色葡萄球菌的结果评定：苯唑西林与头孢西丁的抑菌圈分别为①耐药：直径le;10mm与le;19mm；②敏感：直径ge;13mm与ge;20mm。 　　凝固酶阴性葡萄球菌的结果评定：苯唑西林与头孢西丁的抑菌圈分别为①耐药：直径le;17mm与le;24mm；②敏感：直径ge;18mm与ge;25mm。 　　1.5 统计学方法 　　本次研究全部数据均采用SPSS 17.0统计学软件进行统计分析，计量资料采用t检验用（x-plusmn;s）表示；计数资料采用chi;2检验用（%）表示，以P＜0.05为界限，作为是否具有统计学差异的标准。 　　2.结果 　　2.1 三种方法结果 　　PCR检测mecA结果：测定218株菌株，共58株MRSA（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌），119株MRCNS（耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌），检出的耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的阳性例数为177株（81.2%）；苯唑西林纸片扩散法结果：测定218株菌株，共58株MRSA（耐甲氧西林金