阿魏酸、当归多糖对神经干细胞缺氧性损伤的保护作用.pdfVIP

目 1 阿魏酸、当归多糖对体外培养神经干细胞缺氧性损伤的保护作 1．1 中文摘要………………………………………………………l 1．2英文摘要………………………………………………………4 1．4材料与方法……………………………………………………11 1．5结果………······……···………······……········…·…·········18 1．6讨论·······················…···························…·············26 1．7结论……………………………………………………………33 1．8参考文献………………………………………………………34 1．9英汉缩略词对照表……………………………………………37 2 致谢…·················…··························…··········．．…．．38 3 神经干细胞(综述)…………………………………………39 ㈠no‰ 1 Y1 t991 阿魏酸、当归多糖对体外培养神经干细胞缺氧性 损伤的保护作用 摘要 sinensis 目的：探讨阿魏酸(fellJlicacid，FA)、当归多糖(angelica stem cells，NSCs)缺 polysaccharide，AsP)对体外培养神经干细胞(neural 氧性损伤的保护作用及其作用机制。方法：(1)NSCs培养、鉴定及 分化。①NSCs培养及鉴定：取生后24h内SD大鼠，75％酒精消毒，无 菌条件下取出脑组织，眼科剪充分剪碎，反复吹打，200目不锈钢滤 网过滤后离心两次，无血清培养基重悬接种，每隔2．3d半量换液，6d 左右分离传代一次。倒置显微镜下观察NSCs形态及生物学特性，免 化：血清培养基诱导分化6天后观察细胞形态学改变，SABC法检测神 经元特异性烯醇化酶(neuron enolase，NSE)、胶质纤维酸性 specific acidic 蛋白(glial舶rilous 将培养第3代的NSCs随机分为对照组和缺氧4、8、12、16和20h组。 缺氧组放入三气培养箱中，对照组则置于常氧培养箱中培养。CCK．8 比色法检测缺氧后各组NSCs的活性变化，以确定缺氧时间。(3)实 验分组：将培养第3代的NSCs随机分为对照组、缺氧组和加药组(FA 度(5mg／L)组。缺氧组和加药组缺氧处理8h，对照组则在常氧培养箱 中培养。收集各组细胞检测下列指标：①NSCs形态学的变化：②CCK一8 测神经元标志物NSE和星形胶质细胞标志物GFAP。(4)图像分析： TRF—A显微成像系统在200倍 对各免疫细胞化学染色的爬片采用Ax07 下观察，每张爬片随机取5个视野照相并计数阳性细胞数。(5)数据 统计分析：用SPSSl3．O统计分析软件包处理数据。所有参数均以均数 ±标准差表示，经单因素方差分析(ANO—WAY)，行配对t检验。结果： (1)NSCs的体外增殖。原代培养第1天可见分离的细胞呈圆形，折 光性强。原代培养3d，可见近球形的细胞团，结构松散，大小不均， 周围有细胞呈碎渣样死亡，5—6d可见细胞连接紧密，呈球形增大，折 光性好，细胞周围碎片随换液逐渐减少。传代后神经球增殖速度较原 代加快，球体较均匀，背景干净，NSCs特异性标志物Nestin染色呈阳 性。将细胞传代培养至第3代，细胞克隆形成能力和细胞增殖活性均 较佳。 (2)体外NSCs的分化：血清培养基诱导分化6天后，可见NSE 染色