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99mTc．MIBI检测化疗增敏剂对多药耐药性 肿瘤细胞P一糖蛋白影响的实验研究 张振蔚吴华 华中辩技大学同济医学院附属同济医院核医学科 MDR是导致化疗失败的重要原因。MDR形成机制复杂，其中以P-gp的过度表达为主要原因”)。化 耐药性。但是，cs均存在不同程度的毒副作用，而且还存在离体和在体效果的差异。目前通过检测P-gp 表达水平评价cs效果的方法，因需采集标本而受到一定的限制。”“Tc—MIBI可作为P-gp的底物而像化 疗药物一样被泵出细胞外，因而能够应用99roTe-M1BI显像来反映P．gP的功能。本实验通过在细胞水平 立和完善上述方法，以能够为临床化疗方案的拟订提供可靠的依据。 材料与方法 一．细胞培养 人乳腺腺癌细胞株MCF-7／Adr，由中山医科大学肿瘤研究所提供。培养方法见参考文献。 二．”“Tc-MIBI的制备 常规方法制备”。Tc．MIBI，并用厂家提供的层析条渊得”“Tc．MIBI放射性化学纯度。大于95％。 三．VRP的应用和细胞内“Tc．MIBI摄取的测定 u 细胞中加入VRP之前细胞进行如下处理：在细胞培养基中加入1 g／mL阿霉素．以杀死已经“返祖” 细胞；更换细胞培养基，使得细胞培养基体积为2mL；每孔中均放入一0．5X0．5era2无菌盖玻片，以获得 “细胞爬片”供后续免疫组织化学染色用。 1．VRP的应用和细胞内”“Tc．MIBI摄取的测定 (1 uCi)：同时取2mLDMEMl0管，各加入”“Tc-MIBllpCi作为总放管；细胞3rc孵育2h后，各 孔用4。c冷水快速清洗3次，阻去除细胞外”“Te．MIBI并终止细胞细胞内外所有膜交换{12J：镊取细胞培 养孔中盖玻片，做免疫组织化学染色；两组每孔细胞消化后收集到试管中，用Y计数器测定CPM值。测 得总放管CPM值，并求其平均值。细胞”“Tc-M1BI摄取率(uptake 十目口)×100％。 (1 uCi)：同时取2mLDMEM uM／L)， 60min、40rain和20min)．收集细胞，后续步骤同上。另取对数生长期细胞．每孔加入VRP(10 pci)；细胞与”“Te．MIBI一起37。C孵育 孵育至第6h、22h、46h和70h时，各孔加入””Tc-MIBI(1 2h(即VRP与细胞作用时问依次为：8h、24h、48h和72h)，收集细胞．后续步骤同上。 四．免疫组织化学染色 采用ABC法进行染色．结合阳性对照片，光镜下(X400倍)每张爬片随机选取15个视野，用 Level，PL)=(实凋值／阳性对照片值) MDS．120图文分析系统测定染色光密度值。P-gp表达水平(P-gp ×100％。 五．数据分析和处理 比较不同时间组UR和P-卧差异是否具有显著性。PO．05时认为差异有显著性。 结 果 一． vRP对细胞摄取”“Te-MIBI的影响 显著性差异(t=1_82，Po．05)。 二． VRP作用时间与细胞摄取”。Te-MIBI和P．gP的关系 各时间点所测UR与PL如表2、3所示。 1．比较不同时间组UR和P-gp差异是否具有显著性 2．VRP作用时间与P-gP、UR相关性分析 和0．81，P0．05)，如图2c。 3．细胞摄取”“Te-MIBI与P-gp表达水平的关系 超过8h)发现，UR和PL呈负相关(r：一0．73，P0．01)。 讨 论 MDR是造成化疗失败的主要原因，也是肿瘤化疗急需解决的问题。造成MDR的生物和分子机制十 MDR细胞最常见的变化。一般认为P．印具有“药泵功能”，通过水解ATP使已经进入细胞内的药