质粒pEGS2SS转染对猪和牛卵巢颗粒细胞增殖和激素分泌的影响.pdfVIP

Animal Bulletin Biotechnology 质粒pEGS／2SS转染对猪和牛卵巢颗粒细胞增殖和激素分泌的影响+ 何晓红1，杨利国p，曹少先3 (1．中国农科院畜牧研究所，北京，100094；2．华中农业大学动物科技学院，武汉，430070； 3南京大学生命科学院南京210093) 摘要：目的：以生长抑素真核表达质粒pEGS／2SS转染猪、黄牛不同类型卵巢颗粒细胞， 旨在探讨生长抑素融合表达产物对细胞增殖和激素分泌的作用。方法：采用脂质体转染方法， 体剂量)，在此最佳条件下将质粒pEGS／2SS转染猪、牛不同类型卵巢颗粒细胞。结果：当脂质 体、DNA的剂量分别为12ug和1．Sug时，卵巢颗粒细胞的转染率最高，迭到13％。在此转染 条件下，将质粒pEGS／2SS转染猪颗粒细胞，96小时后，中等卵泡颗粒细胞(MGCs)的增殖 显著小于空质粒对照组(P0．05X在转染后48—96h，猪SG-Cs和MGCs的孕酮分泌量显著多 于空质粒对照组(P0．05)。将质粒转染牛颗粒细胞，96小时后，牛SGCs的增殖显著大于空质 粒对照组(P0．05)，激素检测没有显著差异。结论：质粒pEGS／2SS转染对猪卵巢颗粒细胞的 增殖有抑制作用，对猪卵巢颗粒细胞的孕酮分泌有促进作用，但对牛卵巢颗粒细胞的增殖有促 进作用，对牛卵巢颗粒细胞的孕酮分泌作用没有影响，说明生长抑素基因融合表达产物在体外 条件下参与卵泡发育的调节。 关键词：生长抑素基因重组质粒；卵巢颗粒细胞；脂质体 ss可通过抑制生长激素分泌发挥其调节作用。1994年,Holst等在卵泡液中发现生长抑素，且与体内孕酮 分泌量成正比圈。人们开始探讨SS在生殖系统中的作用，近年来的研究发现，生长抑素对生殖系统的一 些组织细胞都有影响，在人的研究中，生长抑素能抑制人黄体颗粒细胞孕酮的分泌例并抑制LH对孕酮 分泌的促进作用州。鼠睾丸内注射生长抑素可抑制睾酮的分泌并降低体内睾酮的基础水平…，生长抑素还 可降低精子活力，并抑制hCG对睾酮分泌的促进作用【6】。进一步的研究发现，(Barnett等)卵巢中有生 长抑素的受体存在”棚，并且有报道表明ss与其受体结合、发挥作用并受性腺激素的橱节…。证明生长 抑素可能在卵巢细胞上发挥生理学作用。研究暗示，ss可能做为调节因子参与生殖系统发育的调解，但 其作用机理是作为“垂体一性腺’’轴的一部分，还是卵巢的局部调节因子，还需进一步的研究。 卵巢颗粒细胞是卵巢中的重要细胞，不仅分泌雌激素、孕酮，还是促性腺激素和多种因子作用的靶 细胞，是研究卵巢发育的良好细胞模型【l””。本实验采用的生长抑素基因重组质粒pEGS／2SS结构如图1 所示，将质粒转染细胞可使细胞表达ss与乙肝表面抗原S的融合表达产物，以探讨转染后表达产物对 颗粒细胞的影响(分裂增殖、激素分泌)，为进一步探讨生长抑素基因疫苗的生理学作用和作用机理奠定 基础。 1材料与方法 ‘基金项耳：国家自然科学基金资助。 通讯作者：杨利国(1962-)，男，教授，博导，主要从事动物繁育与生物技术研究tE-mail：ylg@m粗．hzau．edo．en 第十次全国畜禽遗传标记研讨会论文集 图1生长抑素基因重组真核表达质粒pEGS／2SS结构图 Plasmid FigX col／flgllr蚯on pEGS／2SS 1．1细菌培养和质粒DNA提取 单菌落于4ml 10min按去内毒素质粒抽提试剂盒 荡(36。C，220转，分)培养15～16h，细菌悬液于4。C离心，3000rpm 说明，提取质粒DNA，紫外分光光度计测OD280和OD260值，计算质粒的纯度和浓度。 12卵泡颗粒细胞的分离 猪卵巢采自南京天环集团屠宰场，保存于冰盒，根据文献介绍的方法m叫71取中等(直径3-5mm) 卵泡和小卵泡(直径1-3mm)，获得单