三种羊水培养方法的比较.docVIP

精品论文 参考文献 三种羊水培养方法的比较 朱晓丹　陈淑芬　陈志华　刘丽雅　欧妙玲　岳梦婷（佛山妇幼保健院　广东佛山　528000） 【摘要】 归纳了产前诊断中羊水染色体细胞培养的关键问题，指出了羊水细胞培养方法的主要进展。讨论了原位培养和培养瓶法的优缺点及原位培养中新方法载玻片培养瓶法优于旧盖玻片法。在此基础上，可见载玻片培养瓶法是最具发展潜力的羊水细胞培养方法。 【关键词】　羊水细胞培养　培养瓶　盖玻片原位法　载玻片培养瓶法 【中图分类号】R714 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2012）19-0294-01 在产前诊断中，羊水细胞培养是羊水染色体检测的重要研究内容。过去研究主要集中在如何提高成功率，随着技术水平的发展，临床一次性耗材及商业化全培养基的出现，大大提高了羊水培养的成功率。人们逐渐把目光转向如何缩短培养时间及收获更多分裂相上，发展出多种羊水细胞培养方法。鉴于羊水细胞培养方法的选择，将对之后羊水染色体核型分析起重要的意义。作者就羊水细胞的关键问题进行了系统的分析和综述。 1　羊水培养方法 1.1培养瓶法 取10ml羊水装在密闭的15ml离心管，以1200转/分钟，离心12分钟。在无菌室的净化工作台吸取上清液，剩余下0.3至0.5ml羊水细胞充分打匀成悬浮液。接种入盛有2.5ml培养液的细胞培养瓶内，把瓶放进37℃CO2培养箱内培养，以便气体交换，培养箱内要饱和温度。静置7天，在倒置显微镜下观察细胞生长情况及换培养液，至第8至10天，细胞生长成许多小群落，并有较多圆形或哑铃形细胞时就可以收集细胞制片[1]。 1.2平皿盖玻片法 取10ml羊水装在密封的15ml离心管，以1200转/分钟，离心12分钟。在无菌室的净化工作台吸取上清液，剩余下0.3至0.5ml羊水细胞，加2ml羊水培养液，充分打匀成悬浮液。小心用移液管滴在4个dish上，靠表面张力，不使细胞悬浮液流溢到玻片外。在37℃CO2培养箱内培养，以便气体交换，培养箱内要饱和温度。培养48小时，使羊水细胞贴附玻片上。然后加2ml培养液。5至6天换液2ml。换液后每天在倒置显微镜下??察细胞生长情况。细胞生长成许多小群落，并有较多圆形或哑铃形细胞时就可以收集细胞制片。 1.3载玻片培养瓶法 取5ml羊水，装在密封的15ml离心管，以1200转/分钟，离心12分钟。在无菌室的净化工作台吸取上清液，剩余下0.3至0.5ml羊水细胞加3ml羊水培养液，加盖密封，颠倒20下成悬浮液，接种入载玻片培养瓶内。把瓶放进37℃CO2培养箱内培养，以便气体交换，培养箱内要饱和温度。培养静置5至6天换液3ml。换液后每天在倒置显微镜下观察细胞生长情况。细胞生长成许多小群落，并有较多圆形或哑铃形细胞时就可以收集细胞制片。 2　培养瓶法与平皿盖玻片法比较 羊水标本以不同羊水量分两组，分别以培养瓶法和平皿盖玻片法进行培养。比较两种培养方法及不同羊水量的培养结果。结果平皿盖玻片联合培养瓶法培养一次成功并获满意核型成功率97.4％。两种方法比较，两组方法比较，两组中均以平皿盖玻片法成功率高于培养瓶法。平皿盖玻片法6至8ml与培养瓶法15至20ml羊水的培养成功率无显著差异。可见，羊水细胞培养中。平皿盖玻片法优于培养瓶法，前者具有成功率高，收获时间早，容易区分真假嵌合型的优点，更适用于羊水量少，孕周偏大者。推荐以培养瓶法联??平皿盖玻片法行羊水细胞培养。[2] 3　平皿盖玻片法与载玻片培养瓶法比较 分别以平皿盖玻片法与载玻片培养瓶法进行培养，比较两种培养方法的培养结果。 载玻片培养瓶法联合平皿盖玻片法一次成功并获满意核型成功率100%.两种方法比较，培养时间及培养成功率无显著差异，均能容易区分真假嵌合型。但收获的克隆总数，载玻片培养瓶法明显高于平皿盖玻片法，且操作步骤较载玻片培养瓶法更简单，大批量标本操作时更具优势。 根据以上对比，载玻片培养瓶法较平皿盖玻片法更具发展潜力。推荐以载玻片培养瓶法联合平皿盖玻片法行羊水细胞培养。 参考文献 [1]梁志成.生一个健康宝宝—遗传优生的奥秘[M].广州:暨南大学出版社,2004. [2]梁梅英,董振宇,宋桂宁.产前诊断羊水细胞培养方法的研究[J].中国临床医学,2008(1).