由D型氨基酸设计自组装短肽D-EAK16构建新型三维纳米纤维支架材料.pdfVIP

V01．30 高等学校化学学报 No．6 2009年6月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES 113l一1134 由D型氨基酸设计自组装短肽D-EAKl6 构建新型三维纳米纤维支架材料 余祖孝1，陈佳2，罗忠礼3 (1．四川理工学院材料与化学工程系，自贡643000； 2．重庆工商大学废油资源化技术与装备教育部工程中心生物材料实验室，重庆400067； 3．四川大学华西医院，纳米生物医学技术实验室，成都610065) 摘要采用D型氨基酸设计自组装短肽D—EAKl6，运用圆二色仪及原子力显微镜等仪器和细胞三维培养， 的透明水凝胶，含水量高达99％，可在细胞培养基(如PBS，DMEM)中形成支架．细胞三维培养显示，该水 的毒性未发现显著性差异．采用D型氨基酸构建的自组装短肽，可提供一个三维基质培养系统，期望能广泛 应用于生物医学工程等领域． 关键词D型氨基酸；D肽；自组装短肽；纳米纤维；细胞支架 中图分类号0629；0657文献标识码A 分子自组装系统已经成为分子生物学、化学及材料学等学科的交汇点．从酵母蛋白中偶然发现能 自组装的离子短肽…，是由8—16个氨基酸构成的短肽自组装体系，可作为细胞培养基质材料，能模 拟生物体内的三维基质环境，具有高纯度、可降解及无免疫反应的突出优点，已被成功应用于细胞工 J．1995 程、组织工程及膜蛋白等领域．上述研究成果都是采用￡型氨基酸构建的自组装短肽系统。2 年，该系统首次用于细胞方面研究∞J，自此拉开了自组装短肽作为三维培养支架材料在细胞工程领域 研究的序幕，支持软骨细胞、成骨细胞及神经干细胞的生长和分化等H“0I． 天然蛋白都是由￡型氨基酸构成的．￡型氨基酸构建的自组装短肽具有较好的生物相容性，在体 内被￡型酶降解．而D型氨基酸的自组装短肽一般不能被￡型酶降解¨1|，体内稳定存在的时间相对较 长．前文¨2 时该二级结构响应pH变化，在不同盐的浓度和变性剂作用下，其二级结构届一sheet趋于稳定，与手性 对映体L—EAKl6有一定的差异性． 子对自组装过程的影响以及细胞在D—EAKl6中的增殖特性．该研究介于化学、材料和生物医学工程等 交叉领域，希望此类新型材料能广泛应用于生物医学工程等相关领域． 1 实验部分 1．1试剂与仪器 CO’smodified Eagle SPC—A-1为生物治疗国家重点实验室提供． 收稿日期：2008-09-11． 基金项目：国家“九八五”-Ⅱ期平台项目和四川省材料腐蚀与防护重点实验室项目(批准号：2008Cm6)资助 联系人简介：罗忠礼，男，博士，从事生物材料研究．E-mail：zhongliho@163．conl 高等学校化学学报 V01．30 GE)． 1．2实验方法 1．2．1 ℃的1．0 mg／mLD-EAKl6样品，用18．2MQ·em水稀释至100p,mol／L，进行CD检测． 1．2．2原子力显微镜分析配制所需浓度的肽溶液，先将5～10止水凝胶滴于干净云母片上，静置 30一60 18．2 S后，用100¨LMQ·em水冲洗3次，将含检测样品的云母片置于超净工作台上，自然晾 干后，采用原子力显微镜观察，扫描模式为敲打模式． 1．2．3 细胞的三维培养和细胞增殖性实验细胞的三维培养过程见文献[3]，细胞三维培养的增殖性 2结果与讨论 2．1 新型自组装短肽D-EAKl6二级结构特征 192 ilm附近有一负峰，218 如图1中插图所示． o 再 宕 善一 2／nm CD of AFM of D-EAKl6