马铃薯StTOM1和StTOM3双干扰植物双元表达载体的构建及转化验证.pdfVIP

基因组学与应用生物学，2014年，第33卷，第 1期，第 22—28页 GenomicsandAppliedBiology，2014，Vo1．33，No．1，22—28 研究论文 ResearchArticle 马铃薯StTOM1和StTOM3双干扰植物双元表达载体的构建及转化验证 宋静静 蒙姣荣 ， 卢晓静，邹承武 陈保善 1广西大学农学院，南宁，530004；2广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，南宁，530004；3广西大学生命科学与技术学院 南宁．530004 通讯作者，chenyaoj@gxu．edu．cn 摘 要 病毒病是制约马铃薯生产的重要因素之一。在拟南芥等植物的研究中发现，抑制寄主因子可 以显著 降低细胞中病毒的累积量，从而缓解病害症状。本研究在获得与拟南芥寄主因子AtTOM1和AtTOM3具有 同 源性的马铃薯基因StTOM1和 StTOM3的基础上，尝试用 RNAi方法 同时沉默StTOM1和 StTOM3。以pUC— CRNAi为中间载体，构建同时含 StTOM1和 StTOM3双基因干扰片段 StT1一StT3的质粒 pUCStT1一StT3一dRi f+1，再将双基因干扰片段 StT1一StT3切下并连接到双元载体 pBI121上 。用农杆菌介导方法，将 StT1一StT3片 段导入马铃薯 中，获得转基因马铃薯小苗，阳性率达到83．6％。RT—PCR检测表明，转 StT1一StT3马铃薯 中 StTOM1基因mRNA的表达水平下调了78％，StTOM3基因下调了81％。StTOM1和 StTOM3沉默转基因马 铃薯的获得，为将来验证和评价 StTOM1和 StTOM3是否为马铃薯病毒的寄主因子及在创建抗病毒马铃薯新 种质的潜力，奠定了基础 。 关键词 马铃薯，StTOM1，StTOM3，植物双元表达载体 ConstructionandIdentificationofaPlantBinaryExpressionConsturctfor thePotatoHostFactorGenesStToM1andStToM3 SongJingjing MengJiaorong。 LuXiaojing ZouChengwu ChenBaoshan。 1CollegeofAgriculture，GuangxiUniversity，Nalming，530004；2StateKeyLaboratoryforConservationandUtilizationofSubtropicalAgro—biore— sources，GuangxiUniversity，Nanning，530004；3CollegeofLifeScienceandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning，530004 Correspondingauthor，chenya~@gxu．edu．cn DOI：10．13417~．gab．033000022 Abstract Viraldiseasesareimportantlimitingfactorsforthepotatoindustry．StudiesinAtabidopsisthalianare． vealsthatinhibitionofhostfactorsresultsinreducedaccumulationofvirusesinthecellsandthusrelievesthe symptom oftheinfectedplants．Inthisstudy．twopotatogeneshomologoustothehostfactorgenesAtToMland AtTOM3otA．tha王iana．StToM1andStTOM3 werecloned．ToobtainStT0M1andStTOM3knockdownpotato plants、RN心 strategywasemployed．FragmentsotstToM1andstToM3weregeneratedbyPCRandhead—to-head genefragmentoftheStT0M1andStToM3inasingleconstructwasobtainedwithaidofthe ntermediatevector pUCCRNAi．TheRNA interferencestructurewasthenintroducedintotheplantbinaryvectorpBI121togenerate theRNAiconstructpBIStT1一StT3一dRi(±)．Agroba