低铅负荷对淋巴细胞膜电位影响的分析.pdfVIP

· 932 · ProceedingofClinicaIMedicine，Dee．2014，Vol23No．12 文章编号：1671—8631(2014)12—0932—03 低铅负荷对淋 巴细胞膜 电位影响的分析 王 峰 (山西省儿童医院，山西 太原 030013) 摘要 目的：探讨不同剂量铅对淋巴细胞增殖及细胞膜电位的影响，进一步明确低铅染毒淋巴细胞膜参数表达 机制。方法：将小鼠脾淋巴细胞悬液分为四组 ，分别为 10一mmol／LPbC12染毒组、10～mmol／LPbC12染毒组、10“ mmol／LPbC1染毒组 ，磷酸盐缓冲盐水 (PBS)作为对照组 ；在培养不同时间段 (0h，24h，48h，72h)的细胞悬液中加 入不等量的单克隆抗体，同时用细胞感受性色素diBA—c4标记淋巴细胞，测定细胞膜电位，从而确定细胞膜受体表 达的情况以及淋巴细胞增殖情况的变化。结果：随Pb“染毒浓度增高及时间延长，Pb 染毒淋巴细胞 ,-liBh—c4荧光 强度明显增加，膜内的电位出现不同程度的升高，细胞膜受体表达呈阳性变化。10～mmo~LPbC1染毒组 淋巴细 胞的增殖指数比较，差异无统计学意义(P0．05)，10‘。mmo~LPbC12染毒组、10～mmo~LPbCI2染毒组染毒72h，淋 巴细胞增殖指数与对照组比较，差异有统计学意义(P0．05)。结论 ：PbC1染毒对淋 巴细胞膜电位表达具有时间依 赖性和饱和性；浓度10 mmo~LPbC12染毒淋巴细胞具有抑制淋巴细胞增殖的作用。 关键词 铅负荷 ；淋巴细胞；细胞增殖 ；细胞膜电位 中图分类号：Q24 文献标识码：B 较高浓度铅暴露在环境中可引起神经行为的异常。据 1．3 淋巴细胞染毒 相关资料显示，居住区环境中低浓度的铅对学龄儿童的神经 加入预先配好浓度的氯化铅(PbC1：)各30 ，使各培养 行为已形成损害，作为一种强烈性的神经毒素，铅也可能对 瓶中PbC12的终浓度分别为 10～mmoFL，10一mmo~L， 儿童的视觉运动功能产生损害。并且铅还可能是一种潜在 10～mmoFL。每次换液时，补入相应量的PbC1，维持其终 的免疫调节因子，相关实验数据证实长期低铅染毒会影响大 浓度不变。另设磷酸盐缓冲盐水(PBS)对照。 鼠的免疫功能。所以研究低剂量铅对细胞膜电位的表达，有 1．4 低铅染毒淋巴细胞膜受体表达率测定 助于阐明分子水平的免疫调控机制，了解受体表达的相互调 分别于培养的0h，24h，48h，72h将细胞悬液加入聚氯乙 控及生物学效应的相互影响，同时可为研究免疫细胞间或递 烯V型塑料板孔内，温育洗涤，继续加入不同的单克隆抗体。 质与细胞间相互识别的物质基础提供一些思路 J。 1．5 淋巴细胞膜电位感受性色素diBA—CA检测 1 资料与方法 利用荧光仪来检测细胞膜荧光强度的变化，并研究细胞 1．1一般资料 内Ca 浓度，Ca2对于淋巴细胞行使正常功能传达信号起 小鼠脾淋巴细胞分离液(购自达科为生物技术有限公 着十分重要的作用，通过对C 浓度的分析间接性地可以知 司)；RPM1640完全培养液(Gibco产品，购自吉泰生物科技公 道淋巴细胞内细胞膜电位的变化，从而可以测定细胞膜受体 司)；二氧化碳培养箱(FORMER，USA)；氯化铅(国产分析 及细胞因子的表达水平。其原理主要在于淋巴细胞膜上 纯)；磷酸盐缓冲盐水(PBS)：购于武汉博士德生物工程有限