马铃薯抗晚疫病体细胞无性系变异筛选技术研讨.pdfVIP

摘 要 以 “费乌瑞它”、“东农303.“早大白”三个马铃薯品种为材料，以叶片和茎段为 外植体，以马铃薯晚疫病菌培养滤液即粗毒素作为筛选剂，研究晚疫病菌粗毒素的产生 条件及其生物活性，分别采用一步筛选法和多步筛选法，在不同浓度毒素的培养基上筛 选抗性愈伤组织，建立了马铃薯抗晚疫病的筛选体系，获得了抗晚疫病的马铃薯体细胞 突变体植株。主要研究结果如下: 1用黑麦液体培养基培养马铃薯晚疫病菌，以其培养滤液为粗毒素，测定了粗毒素 对马铃薯叶片、愈伤组织、番茄种子发芽及胚根生长的影响。结果发现，粗毒素致使马 铃薯叶片发病、愈伤组织生长缓慢易褐化、番茄种子发芽率下降、胚根生长受到抑制， 并且随浓度的升高而毒性增强，在不同作物和材料上试验结果一致。其中粗毒素对番茄 种子发芽、胚根生长的影响更明显，因而可以用番茄种子发芽率作为指标来研究毒素的 培养条件。 2对马铃薯晚疫病病原菌粗毒素产生条件的研究结果表明，适宜晚疫病粗毒素培养 的培养基为黑麦液体培养基，培养时间为14-18d,温度为20-220C,pH为6.0-7.0，在黑 暗条件振荡培养，产生的粗毒素毒性最强，可严重抑制番茄种子发芽。 3马铃薯晚疫病菌粗毒素具有一定的热稳定性，经高温高压处理后仍能强烈抑制番 茄种子的发芽及胚根的生长。 4用 “费乌瑞它”、“东农303,“早大白”的叶片和茎段及其产生的愈伤组织作为 筛选材料，以马铃薯晚疫病粗毒素作为筛选压力，采用一步筛选和多步筛选法筛选马铃 薯抗晚疫病细胞变异无性系，结果表明:不同品种的叶片、茎段、愈伤组织对毒素有不 同的忍耐力，“费乌瑞它”忍耐的最大粗毒素浓度为40%,“东农303”和 “早大白”为 50%;随粗毒素浓度的增大，愈伤组织相对生长量降低、生长状态由健康的淡绿色逐渐 转变为褐色。同种品种的茎段愈伤组织比叶片愈伤组织耐粗毒素的能力强。马铃薯晚疫 病病原菌粗毒素对不定芽的分化有显著的抑制作用。 5将对照和变异株小苗分别培养在含毒素和无毒素生根培养基上，观察发现:在无 毒素的培养基上生根率都很高;但在含毒素的培养基上，变异株生根率大于20%，而对 照基本上等于0。变异株的耐毒素力是可持续的。 6试验获得了抗马铃薯晚疫病再生苗，研究其抗性细胞系稳定性，结果发现细胞无 性系变异植株具有抗病能力;对耐病变异株进行盆栽接种病原菌试验观察到变异株耐病 性明显高于对照;说明变异株有抗病性。 关键词:马铃薯;晚疫病;粗毒素;体细胞无性系变异;离体筛选 StudyontheSelectionofCellMutantLines ResistanttoPhytophthorainfestansinpotato Postgraduate:XingYujun Supervisor:Prof.ChengZhihui (CollegeofHorticulture,NorthwestSci-techUniversiytofAgricultureandForestryYangling,Shaanxi,712100,China) Abstract Theresearchusedstemandleafofthreepotatocultivar,Favorite,Dongnong303and ZaodabaiasexplantandtheculturefiltrateofPhytophthorainfestansastheselectiveagent Thebioactivitiesandcultureconditionofthecurdetoxinwereas sayedatthebeginningofthe study.ThenthecallusresistanttoPhytophthorainfestanswasselectedbyusingone-stepand multi-stepscreeningmethodatdifferentconcentrationofthecurdetoxin.Thedisease resistantmutantselec