PHB混合培养过程细胞代谢能的调控研究.pdfVIP

PHB混合培养过程细胞代谢能的调控 钱梓文1远山正幸1清水和幸2 1．生化工程国家重点实验室，中国科学院化工冶金研究所，北京100050，353信箱． 02 2．日本九州工业大学，十¨p-r学部，生化工程科学系，日丰彳吾网，饭市820—85 冀要：研究生物可降解塑料PHB(肿扣卢．如扎掣buOmate)生产的低成奉和高产率发酵．采用廉价碳 弹一一度食品牲点作为原料，其中同时具有葡萄糖和乳酸．培养实验是在同一5L发酵罐中先后接八两 PHB．两种茸共生健两个过程交织耦夸在一起，但是乳酸杆茵喜氯而厌氧，鼻养产碱茵毒氧而当氙饥饿 时积累PFIB，考虑真养产碱茵在乳酸里的代谢，有异养和真养两种途径，其中两种重要代谢通量是生物 氧化能ATP和还原能NADPH，二者部与供氧密切有关．本文提出供氧的节律控制，随着葡萄耱浓度6々 改变而改变节律，通过取样进行细月蜮碎后．由荧光分析仪监剥不|；l发酵阶段的ATP和NADPH，发现 两种代谢能随着溶氧控制的不同节律变化而起伏，节律控制使混夸培养的PHB的浓度比设定点供氩方 法提高一掊． 关t词：PHB混合发酵；节律控制： ATP，NADPH测定 1前言 butyrare)是一种可降解的生物塑料聚合物。近年来国际、国内用 PHB(印妒芦一hydroxy 细菌发酵大规模生产PHB已经成为非常热门的课题。但是生物塑料实现工业化的一个主要障碍是 它的成本远高于传统的石化塑料，其主要原因是细菌发酵的碳源葡萄糖成本很高。日本九州工业 大学的Shimizu等试图采用廉价碳源．废糕点中的葡萄糖和乳酸生产PHB。实验研究了在同～发 再用真养产碱菌兄日Ⅳ￡m肋us消耗乳酸产生P}lB。在两菌共存的发酵体系里由于所需的生存条件 和代谢途径差异很大，甚至互相抵触，导致最终产物PHB浓度很低。本文应用时空混沌控制方法[7] 来协调同一时空体系下多菌共存的培养条件。由真养产碱菌在乳酸里的代谢途径表明[1]，当细胞 内两种生物能ATP和NADPH的浓度增加时，PHB 产量也增加。因此，本文提出氧供给的节律控 制．并且根据在线监测的葡萄糖浓度改变节律， 图1PHB混合培养的两菌共存发酵体系以及在 实验表明ATP和NADPH呈现节律变化，并且， 线检测和离线分析的生化变量 使PHB浓度比常规的线性设定值控制方法提高 一倍。 湖霄蕾■甜E譬舅 2PHB混合培养过程的代谢调控 2．1提高PHB产率的控制镱略 PHB混合培养是两种菌在同一时空下的共 生和代谢过程，混合培养体系如图1所示。在 同一发酵罐里，乳酸杆菌厌氧而需氮，真养产 碱菌需氧而在氮饥饿时才产PHB。为了提高真 养产碱菌的PHB生产，设计以下控制策略。(1)． 碳源的控制。因乳酸杆菌消耗葡萄糖产生乳酸， 它是真养产碱菌的碳源．乳酸浓度太低真养产 ※本题目是日本学术振辩会资助的合作研究项 鄱朔_折 姗·口蜘 碱苗生长缓慢．但是浓度太高又抑制真养产碱菌增殖．因此葡萄糖流加须与真养产碱菌的生长关 联。(2)．氮源控制。乳酸杆菌消耗葡萄糖产生乳酸的速率与氮源充足供应有关．因此在发酵前期和 中期要有适当的碳氮比(C／N)，根据氮的消耗补足葡萄糖，而在中、后期氮控制为零。(3)．供氧控 制。在PHB混合培养过程中．当溶氧高．葡萄糖消耗慢．乳酸浓度偏高，PHB浓度低．而溶氧低． 葡萄糖消耗就快，乳酸浓度低．PHB浓度高。这些矛盾通过搅拌和转速调节来协调。 2．2真养产碱菌在乳酸里的代谢途径和代谢能 图2所示为真养产碱菌在乳酸里的代谢 途径[3】包括真养和异券两种途径。当真养代 谢时真养产碱菌先从乳酸经过丙酮酸转化成 为乙酰辅酶A，再由乙酰辅酶A通过三酶合 成途径，三酶即①B．酮硫解酶(B． K眦othiolase)，②乙酰乙酰辅A还原酶 neductase)．③PHB合成 (acetoacetyl—CoA 酶．(在图2中的r2。，r22，物，)真养产碱 菌在乳酸里生长时乙酰乙酰辅酶A还原酶是 一个NADPH连接酶。NAD