高效液相色谱法测定患婴血清中维生素B2研究.pdfVIP

首届中国中西部色谱掌术交流会 2006Jr-8月 高效液相色谱法测定患婴血清中维生素B2· 周琳1， 莫建光1， 黄岛平1， 陈秋虹一，陈玉君2 (1广西分析测试中心南宁530022)(2广西南宁铁路医院南宁530001) ■要：研究了光疗期黄痘患耍血清中维生素b的高效液相色谱测定方法．秉用Oasiscn小柱吸附富集血清中的维生素＆．除去蛋白质等 Lena 杂质的前处理手段。以Phenomenex 525nm)测定维生素b含量，方法平均回收率为98．O％，RSD-3．8I。最低检出浓度为0．8ng／nL。获得满意结果． OasisC18小柱 关键词：IIPI,C血清维生素m 质的作用增强Ⅲ，光疗是治疗新生儿黄疸的常用方法，但同时不可避免地造成人体内VitB2的下降， 我们承担的‘新生几光疗下VitB2含量的动态分析及缺乏的预防研究》课题，需要对不同光疗期患 定国内曾见有电修饰电极法脚等方法报道。本文采用了OasisC,a小柱将血清中的VitB2富集，洗去 果令人满意。 1实验部分 1．仪器与试剂 Lu舱Cl。 (250咖X4．6m5Ilm)分析柱，金科色谱工作站，OasisC18小柱。 血清样本(由广西铁路医院提供) 1．2色谱条件 色谱柱：PhenomenexLuna 5Ilm) Cn(250mmX4．6mm 流动相：甲醇：0．02mol／L乙酸铵=3：7 流速：1．OraL／rain 检测波长：激发波长：425nm,发射波长：525nm 1．3样品前处理 将Oasis 洗去残留血清和其他杂质，最后用0．5mL40％甲醇洗脱，洗脱液即为上机液。 1．4标准溶液 lml定容至100mL作为贮备液II，再吸取贮备液II ’作者简介：周琳1965．)，女．广西南宁人．工程师．Tch0771-5318151。E-mail：zhoulingx@tom．o帅 269 首届中国中西部色谱掌术交流会 2006年8月 量为40ng／mL。 1．5测定 Ill上机液和标准工作液注入高效液相色谱仪中，测出VitB2峰面积，外标法计算 分别吸取20 血清中VitBz含量。本方法最低检出浓度为0．8ng／mL。 2结果与讨论 ．．、 。 2。I前处理最佳方法选择 吸取血清加入30％三氯醋酸混匀，于沸水浴中加热20分钟，高速冷冻离心除去血清中的蛋白 等杂质后取上清液测定。该法过程长。操作步骤多。稀释倍数大，VitBz易损失，结果不稳定。重现 性差。VitB2在碱性条件下转化为光黄素，可增高响应值，提高检测灵敏度，但该法用氯仿萃取样 液乳化现象较严重，萃取不完全，回收率低。本法采用OasisCt。小柱吸附VitBz，将血清中易污 染分析柱并影响色谱分离和检测灵敏度的蛋白质和极性杂质被分离出来，使得VitB2色谱峰峰形单 一，变窄(见图1)且柱效、柱压稳定，在连续测定了200多份血清样本后柱效尚能保持良好，方 法重现性和精密度均满足实验要求。 (a) (b) 圈t标准(-)和样品(b)色谱圈 2．2 Oasis C，。小柱对VitBz的吸附能力和解吸水平考察 2．2．1吸附能力试验 将50、100、150、200、250、300VitB2分别注入OasisC-。小柱中，按本法处理测定， ng 结果表明OasisCte小柱对VitBz有很好的吸附能力，至300ng均未见泄漏，该吸附量已大大超过每 毫升人体血清中VitB2含量水平脚，满足本实验要求。 2．2．2解吸水平试验及洗