番荔枝属Annona+spp几种果树的酯酶和多酚氧化酶同工酶分析研究.pdf

108 中国园艺学会热带南亚热带果树分会成立大会暨首届学术研讨会论文集 番荔枝属【Annona spp．)几种果树的 酯酶和多酚氧化酶同工酶分析 王家保1杜中军1陈业渊2金志强1邓穗生2罗石荣2 (1．中国热带农业科学院热带生物技术研究所I热带作物生物技术国家重点实验室，海口571101； 2．中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所，儋州571737) 摘要：分类和亲缘关系的研究对番荔枝种质资源的保存和利用具有重要意义。本研究利用垂直板 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对番荔枝属7种果树共14份资源进行了酯酶和多酚氧化酶同工酶分析。 结果表明：2种同工酶共表现23条酶带，其中酯酶同工酶9条，多酚氧化酶同工酶14条，不同种的番荔 枝间酶谱差异较大。2种酶的同工酶酶谱不能区分两份红毛榴莲和两份毛叶番荔枝；除此之外，其它各份 资源均可一一区分。各资源间的遗传距离在0．000．0．895之间。聚类结果显示，14份番荔枝资源可分为2 大类，第1类包括牛心番荔枝、红毛榴莲、光叶番荔枝、自毛榴莲和大果番荔枝；其余的为第1I大类， 包括杂交番荔枝和普通番荔枝两个种的8份资源。 关键词：番荔枝； 酯酶； 多酚氧化酶； 同工酶 番荔枝(Annonn spp．)是番荔枝科番荔枝属几种果树的泛称，原产热带美洲，我国约有400多年 的栽培历史，在华南广泛分布。近年来，随着优良品种的引进推广，番荔枝栽培面积逐步扩大％在我 国，番荔枝主要依据果实及枝条等的性状进行分类，如红毛榴莲、大果番荔枝、白毛榴莲、牛心番荔 枝、软枝释迦、粗鳞番荔枝、细鳞番荔枝等嘲。由于番荔枝多为有性品种，以实生繁殖为主，上述命名 方式不能很好地区分各个品种，亦不能为进一步培育优良品种提供充分依据。近年引进的一些杂交番 荔枝的优良品种，如非洲骄傲等，由于后代发生性状分离而不能用种子繁殖，利用共砧则根系病害严 重团。寻找与之嫁接亲和的优良砧木资源成为推广这些优良品种的必然措施。采用适当的方法恰当地评 价番荔枝各种与品种之间的遗传关系，可为解决上述问题提供依据。在国外，已有研究者用RAPD嗍、 同工酶蟑1技术评价了毛叶番荔枝若干品种的亲缘关系，但针对国内资源没有类似的研究报道。同工酶作 为基因的分子表型，是一个比较灵敏的遗传指标，已广泛的应用于果树品种鉴别、亲缘关系分析等嘲。 本研究拟用同工酶技术对番荔枝属几种果树的遗传关系进行评价，以期为番荔枝资源的优化利用提供 基础。 1材料与方法 1．1 材料实验所用番荔枝资源的基本情况如表1所示。采取全光照下一年生枝条上的中部功能叶片 提取同工酶。 1．2方法 中国园艺学会热带南亚热带果树分会成立大会暨首届学术研讨会论文集 109 1．2．1 同工酶提取所采叶片先用ddH：0洗净，滤纸吸干，将0．29左右叶片剪碎于玻璃研钵中，加入 Vc+O．006M lml冰上预冷的0．1MPH8．0Tris—HCl提取缓冲液冶’：0．006M 一巯基乙醇+0．006M抗坏血酸)，冰上充分研磨，然后转入1．5ml离心管，4。C下8000 g离心20分钟， 取上清液，再加入等体积50％的甘油，混匀，一20。C贮存备用。 1．2．2凝胶的制备采用垂直板不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳。按文献[7】介绍的方法制备聚丙烯酰胺凝 胶，其中过硫酸铵、核黄素均改用过硫酸钾代替；浓缩胶浓度4％，分离胶浓度7％。 110 中国园艺学会热带南亚热带果树分会成立大会暨首届学术研讨会论文集 1．2．3点样与电泳多酚氧化酶点样40“l、酯酶点样60扯l；以溴酚蓝作前沿指示剂。 在4。C的冰箱中进行稳压电泳，浓缩胶部分为150V，当溴酚蓝电泳到分离胶时加压至250V，电泳 约5小时后，当溴酚蓝线移至离玻璃板下端2—3cm处时停止电泳。 1．2．4染色参考胡能书¨1的方法进行。 1．2．5结果记录 照在各迁移率处酶带的有无和染色深浅绘制示意图