冬虫夏草的随机扩增ＤＮＡ遗传分化.pdfVIP

遗传 学 报，24(5):410-416,1997 Acta GeneticaSinica 冬虫夏草C（ordycepssinensis）的随机扩增 多态DNA及其遗传分化 陈永久 ‘王 文，杨跃雄2宿 兵 ‘张亚平to 熊绿芸3何照范”舒 畅2杨大荣2 (1中国科学院昆明动物所细胞与分子进化开放研究实验室 昆明 650223) (2中国科学院昆明动物所资源昆虫研究室 昆明 650223) (3贵州农学院生化营养研究所 贵阳 550025) 摘要 本文对来自青藏高原3个区域5个具有代表性地方的13个冬虫夏草 C（or办ceps sinensis[Berk.]Sacc.)样本进行随机扩增多态DNA(RAPD）分析。19个随机引物获得的 RAPD谱带清晰并呈现多态，单个引物获得的RAPD片段数在3.10个之间。该19个引物在 每个样本中扩增的RAPD片段总数平均约为65个。基于遗传距离分析，受试的13个冬虫夏 草样本中，来 自同一地方的样本间遗传差异甚微，同一区域不同地方的样本间遗传差异较大， 不同区域的样本间遗传差异最大。这说明冬虫夏草地理群体间存在着遗传分化。应用 UPGMA和N3方法构建的分子系统树显示，来自5个地方的冬虫夏草实际上可以归并为显著 不同的3个组，对应于样本来源的3个区域，提示RAPD标记在冬虫夏草群体中有显著的地区 特异性。我们的结果还表明，冬虫夏草地理群体间的遗传差异度与地理距离呈正相关。因此， RAPD作为有效的遗传标记，可用于研究冬虫夏草的遗传多样性、起源以及系统演化等。 关键词 冬虫夏草，RAPD,遗传分化 冬虫夏草C（ordycepssinensis[Berk.]Sacc.)是我国极其稀有的药用和食用珍品，具 有多种医疗和滋补功能 【，’‘］。目前，通常品质的冬虫夏草市场价格为每千克12000元左右。 在分类学上，冬虫夏草属于虫草属(Cordyceps)，为一种寄生于鳞翅目昆虫蝙蝠蛾 (Hepialusspp.）幼虫中所形成的虫生真菌[1,5,710其生活史分有性型和无性型，通称的冬虫 夏草即为有性型形态[2,3,4,6]e野生的冬虫夏草主要发生在青藏高原，海拔4000-4500m左 右，这些地区的地势由西北向东南倾斜，也就是青藏高原向东延伸的部分[1}［。长期以来我 国学者对冬虫夏草的寄居昆虫研究较多，尽管冬虫夏草被认为只是虫草属中的一个种，但 寄居的蝙蝠蛾种类却有近40种[5,［71。目前对其虫草部分 C（ordycepssinensis[Berk.] ①联系人 国家自然科学基金、云南省应用基础研究基金、国家杰出青年科学基金、云南省引进与培养人材基金资助 本文于1996-01-10收到，1996-04-08修回 5期 陈永久等：冬虫夏草 C（ordycepssinensis)的随机扩增多态DNA及其遗传分化 411 Sacc.)研究非常少。近年来随着冬虫夏草的价值越来越受到人们的重视，无性栽培工作得 到了发展，当前分离自冬虫夏草被确定为无性型及其未确定的相关真菌有中华束丝袍 (SynnematiumsinenseYinetShensp.nov.)，中国金抱霉 C（hrysosporiumsinenseLiang sp.nov.)和蝙蝠蛾柱霉S（cytalidiumhepialiC.L.Lisp.nov.）等[2,［3,4,61。但它们在遗传上 的差异尚不得而知。 由于冬虫夏草是青藏高原特有种，又生长在海拔3900m以上，至今尚未见有关种内分 ， 化的资料。但近年来一些学者认为，不同地区的冬虫夏草不仅寄主昆虫的种类不同，而且 形态上也存在差别 杨（大荣，杨跃雄。个人交流）。此外，冬虫夏草作为我国特有的珍奇物 种，随着近年来其野生资源的过度采掘，一些地区的冬虫夏草已濒枯竭，建立有效的保护 措施已不容忽视。因此从遗传学角度研究冬虫夏草，对于阐明野生冬虫夏草群体的遗传 结构，确定种级和种下分类，以及评估各地冬虫夏草的遗传资源状况都是必不可少的基础 性工作。 随机扩增多态DNA(RandomamplifiedpolymorphicDNA）是一种以单个合成的寡聚 核昔酸为引物的PCR技术[14［,151。通常这些引物是IObp左右