缓冲液成分对固相pH梯度等电聚焦的影响研究.pdfVIP

第 12卷 第33期 2012年 l1月 科 学 技 术 与 工 程 Vo1．12 No．33 Nov．20l2 1671— 1815(2012)33-9079—04 ScienceTechnologyandEn~neefing ⑥ 2012 Sci．Tech．Engrg． 化工技术 缓冲液成分对固相pH梯度等电聚焦的影响 吴 闯 (辽宁石油化工大学环境与生物工程学院，抚顺 113001) 摘 要 分别从水质、DTF(二硫苏糖醇)含量及含盐缓冲液三个方面对等电聚焦过程进行 了对比。通过电学参数变化，研究 了三者对聚焦进程的影响。结果表 明：高质量的水、低含量的DTI和盐可以缩短聚焦时间，从而提高聚焦质量。可以把电学 参数的变化作为优化和控制等电聚焦过程的指标，为正确设计合理的双向电泳实验流程提供依据。 关键词 等电聚焦 双向电泳 固相pH梯度 蛋白质组学 中图法分类号 T0028．47； 文献标志码 B 双向凝胶 电泳是蛋 白质组学研究的关键技术， 上限 J。 是能同时分离几千种多肽并对其进行定量研究的 适当控制等电聚焦过程中电学参数的方法并 方法，其中最重要的一项进步就是引入 了固相 pH 未得到充分的认识。在等电聚焦过程中记录电学 梯度技术，简称 IPGs_】 。固相pH梯度等电聚焦是 参数就可以对整个运行过程进行评价并对最终的 双向电泳进行蛋 白质组学研究的起始步骤，其中样 电学性状进行分析。这样的分析对于最佳迁移参 品的预处理是双向电泳成功进行的关键步骤之一。 数的确定以及遇到的问题的解决都很有帮助。 没有任何一种缓冲液能够普遍适用于所有蛋 白样 品的提取和溶解。因此合理设计缓冲液成分，对于 1 材料和方法 提高分辨率尤为重要 l4J。一方面，提取尽可能多 1．1 仪器 的蛋白并保持这些蛋白在双向电泳过程中的可溶 Bio—RadPROTEANIEF等电聚焦仪 性，这一点通常通过向提取液中加入表面活性剂来 1．2 试剂 实现。另一方面，样品中包含的离子性组分越少， 所有试剂和材料均为 Bio．Rad产品。ReadyS- 等电聚焦就会越成功。然而，离子对等电聚焦的影 trip7em和 17cm胶条，pH3一l0。 响并不经常引起注意。目前普遍采用的是在文献、 试剂 1：40mmol／LTfis，8mol尿素，4％(w／v) 电泳仪器使用说明书及电泳仪厂商的培训 中介绍 CHAPS，0．2％(w／v)Bio—lytepH3—10。 的标准方法 J，但对一个新的样品很难判断最佳的 试剂 2：7mol尿素；2mol硫脲；4％ (w／v) 方法。同时，双向电泳的初学者经常遇到的一个问 CHAPS；0．24％(w／v)Tritonx—l00；0．2％(w／v) 题就是电压无法升到设定值。IPG胶条中的电流通 Bio—lytepH3— 1O。 常被限制在每根胶条 50 A 以减小过热的影响。 样品为小鼠脾脏提取的可溶性蛋 白，平均分子 温度高于30oC，样品中的尿素就会开始分解为氰酸 量为40kD。 盐，进而增加蛋白氨基甲酰化的危险。如果用其他