雌激素与三苯氧胺对人乳腺癌细胞株MCF7 KLK6表达水平的调节研究.pdf

KLK 雌滑哥蓑与三苯氧胺对人乳腺癌细胞株McF-76表达水平的调节 陈英剑胡成进闻新棉 济南军区总医院实验诊断科济南，250031 KLK 【摘要】 目的探讨雌激素与三苯氧胺对人乳腺癌细胞株McF．76表达水平的调节作用。 方法分别采用荧光定量逆转录．聚合酶链反应和流式细胞术，检测雌激素和三苯氧胺作用后人乳腺 KLK6mRNA和蛋白表达水平呈下降趋势，经三苯氧胺与细胞作用72小时后，呈增高趋势。结论雌 KLK6 激素对MCF-7 mRNA和蛋白表达水平有下调作用。 雌激素；三苯氧胺 【关键词】乳腺癌； 组织激肽释放酶6(KU巧)； 肽释放酶(Human 高度保守的。KLK在多种正常组织中表达，有研究表明在多种肿瘤组织中KLK高表达，有望成为有 价值的肿瘤标志物“1。KLK基因家族有许多共同点，其中大多数基因是受类固醇激素调节的。 M)和 表达嘲，用组化的方法发现hK6在卵巢癌组织表达增高“，用SAGE和EST数据库分析认为在乳腺癌 组织中KLK6表达降低圈。我们的研究发现KLK6mRNA表达水平在乳腺癌组织表达增高，而增高的机 制尚未阐明。此外，临床上常涉及雌激素的替代疗法，雌激素对KLK6mRNA表达水平的影响情况也 KLK 尚不完全清楚。本研究拟探讨雌激素与三苯氧胺对人乳腺癌细胞株MCF-76表达水平的调节作 用，为进一步阐明KLK6的功能及在肿瘤发病中的作用提供一定的信息。 材料与方法 一、材料来源 二、实验方法 1．细胞培养：MCF-7细胞株常规方法培养于RPMl 1640培养液中冶。10％，Jx牛血清，青霉素终浓 度为100U／m1、链霉素终浓度为100u g／m1)，置于37。C、含5％C02温箱孵育，O．25％胰蛋白酶消 化传代。17—13E2或三苯氧胺用无水乙醇溶解，用RPMI1640培养液配制成工作液。取生长良好的 mol／L17一B 含lO。1‘，10-”，10’，104 E2的培养液以及1矿，10％ol／L三苯氧胺的培养液，每组各设3个 复孔，继续培养3d。 2．17一B RnaselOmmolA 成单细胞悬液，PBS洗涤后，取106个细胞与PI染色液(33p．g／mlPI，0．13mg／mlA 件。 3．MCF．7细胞中KLK6mRNA表达水平的检测： (1)细胞总RNA的提取：将上述孔板中的培养液彻底弃干净后，加入lmlTrizol到孔板中裂解 细胞，RNA提取按说明的一步法进行。所得总RNA质量和浓度通过O．7％甲醛琼脂糖凝胶电泳和紫外分 光光度计分析。RNA样品置于一70℃冰箱保存。 引物，并使上下游引物跨越一个内含子，以避免基因组的污染影响结果。GAPDH引物设计参考文 献问(表1)。 表1 KLK6和GAPDH的引物序列 g， 20u lmM，RNase dT 5mM，dNTP inhibitorl6U，AMV 1反应体系中包括：MgCh RTaseⅪ。2U，Oligo