发菜多糖的结构分析研究.pdfVIP

发菜多糖的结构分析 秦韶燕，戴玉杰‘，贾士儒，谭之磊，郭伟，张峰；丁文杰 摘要：对分离纯化后的发状念珠藻胞外多糖进行了结构分析。采用超滤浓缩与乙醇沉淀法提取 液体悬浮培养的发状念珠藻胞外多糖，经离子交换和凝胶柱层析得到纯化多糖。经酶解、高碘酸氧 化、刚果红实验、元素分析以及原子力显微镜等研究分析多糖的化学结构。结果表明：发菜多糖具 有有序的三螺旋结构，含有B一(1—4)糖苷键。用原子力显微镜(AFM)对发菜多糖的微观结构进行 观察，多糖分子聚集紧密成团，形成厚度约1．O—15．O衄直径为50—200姗的球面。 关键字：发菜；多糖：结构 发菜(^，Ds，Dc夕昭P，f扣，．me)是一种陆生性蓝细菌(蓝藻)，常见于我国西北宁夏、 甘肃、新疆、内蒙古等省区。从野生发状念珠藻中分离得到的多糖NostonaIl对单纯疱 A 疹病毒(HSV．1)、人巨细胞病毒(11umall vims)等 糖【11。目前对发菜的研究多集中于发菜人工培养和生理生态的研究上乜。31，也有发菜多糖 的生理活性方面的报道。但是对于发菜多糖的结构方面的研究尚未见报道。 本文以发菜多糖为材料，经离子交换和凝胶柱层析得到纯化后多糖。对多糖的连接 方式，构象以及其他结构进行了分析，以加深对发菜多糖结构的认识。 1材料和方法 1．1实验材料 1．1．1发菜多糖，由本实验室按文献[]经细胞深层培养获得，经离子交换和凝胶层析纯 化后备用。 1．1．2试剂 Q一淀粉酶、纤维素酶，高碘酸钠，刚果红、浓硫酸、硼氰化钠等，以上试剂均为 分析纯。 1．1．3仪器 C瑚RIS公司)；元素分析仪，原子力显微镜(日本JEOL公司JSPM．5200) 1．2方法 基金项目：国家高新技术研究与发展计划(863)(2008AAlOZ326)和国家自然科学基金 (N020376061资助项目 +通讯作者：戴玉杰(1965-)，男，副教授，硕士生导师，电子邮箱埘dai@126．com 1．2．1酶法分析14l 1．2．1．1 Q一淀粉酶酶解： IIlL min后lmL加入适当稀释的Q一淀粉酶液 取O．5 0．5％多糖溶液，37℃预热20 h，加入3，5一二硝基水杨 (用0．2mol几pH6．9的磷酸盐缓冲液配制)，37℃保温1．5 酸试剂1lIlL，放入沸水中煮沸5min，冷却。稀释5倍后于540咖测定吸光度值。 1．2．1．2纤维素酶酶解： m01／L 4．8的柠檬酸缓冲液溶解。 方法同1．2．1．1，纤维素酶用0．1 pH 1．2．2刚果红实验∞】-一构象的测定。 2mg多糖样品中加入2．0mL去离子水和2．OmL80“mo儿刚果红试剂，逐渐加入 4．0moL，L 件下的最大吸收波长。 1．2．3高碘酸氧化161一一级结构的测定 分别称取多糖样品20 mo儿高碘酸钠溶液，于4℃下暗处放置， mg，加一定量O．015 Im 间或振摇。于4、24、48h…恫隔时间取样稀释250倍后，使用紫外分光光度仪在223 处测定吸光度值，直至达一稳定值，计算高碘酸钠的消耗量。另取5mL反应液，加乙二 醇1mL，10111in后以O．0lmol／L氢氧化钠滴定甲酸的释放量。 1．2．4元素分析 样品在120℃干燥6h，用元素自动分析仪自动分析。 1．2．5原子力显微镜观测‘7l 把经纯化后的多糖(1m∥mL)溶于去离子蒸馏水中，冷至室温，再稀释，加热溶解， 冷却，直至样品浓度为O．1u∥mL．通过加热使样品溶解完全且减少大聚集体的存在．取 5 7)滴在新鲜解理的云母片上，