常规石蜡包埋技术.pptVIP

尼氏体 常规石蜡包埋技术 实验目的 实验原理 实验材料 实验步骤 7．包埋?? 将组织块和石蜡置于包埋框内， 冷却即成蜡块，组织获得了一定硬 度和韧度，就可以切成微薄的切片。 * * 一氧化碳中毒 石蜡包埋、切片 免疫组化 图像分析 激光共聚焦 石蜡包埋 熟悉石蜡包埋过程和方法 石蜡包埋 在显微镜下观察人体组织，必须将组织切成以微米为单位的 薄片，使其透光并易于观察，但直接切取柔软组织是难医办到 的。 石蜡包埋法是将“支持物质”－石蜡渗入组织内部，而水 与石蜡又是不相混合的，所以在浸蜡和包埋前必须将组织内 所含的水分脱去。一般是浸入逐级增加浓度的酒精来完成。 由于酒精和石蜡不能混合，再用二甲苯或冬青油置换出组织中 的酒精，使其透明，然后放入融化的石蜡中。将浸蜡的组织块  置于包埋框中，冷却后组织块便具有石蜡的硬度，切片机便能  将组织切成薄片。 石蜡包埋 1.甲醛、酒精、二甲苯、石蜡等 2.切片机、切片漂烘控温仪、 恒温箱、包埋框、载玻片等 石蜡包埋 1．取材??取新鲜组织,切成3×5×2mm小块。  在组织细胞材料准备的过程中，不仅要求保持组织细胞形态完整，更要保持组织细胞的抗原性不受损或弥漫，防止组织自溶。标本离体后30分钟内应进入固定液或低温保存。 石蜡包埋 2．固定??常用固定液有10%中性甲醛、 4%多聚甲醛等等。 3．冲洗??组织固定后，一般必须经过自来水流 水冲洗。 固定液量：4倍于组织体积进行组织固定。固定时间：不能过长，随着固定时间的延长， 对组织抗原的检出强度将逐渐降低。     石蜡包埋 4．脱水??通常多用酒精脱水，为减少组织 收缩，脱水酒精的浓度必须由低浓度 开，逐级升高浓度。一般始从70%酒精（2h） →80%酒精（2h）→90%酒精（1h） →95%酒精I（1h）→95%酒精（1h） →100%酒精I（1h）→100%酒精II（ 1h ）。 原则是脱水透明要充分但不能过，否则造成组织的硬脆使组织切片困难。  石蜡包埋 石蜡包埋 5．透明? 1/2冬青油（2h）→冬青油（过夜） →二甲苯洗涤（5~10min）。 6．浸蜡?? 石蜡I（ 1h ） →石蜡II（ 1h ） →石蜡III（1h）。  温度不能高，不要超过65℃否则造成组织的硬脆使组织切片困难， 即使能切片，也使切片不能完好平整， 染色过程中极易脱片，对免疫组化染色抗原的定位及背景都不利。 石蜡包埋 石蜡包埋 8、切片?? 进行连续切片，厚5μm左右， 放入45oC漂烘仪内进行展片。 9、裱片?? 待蜡片展平后进行裱片。 10、烤片??将切片放置60oC温箱3~5h， 使切片粘贴牢固，待用。 切片时必须保持切片刀锐利，切片要薄而平整、 无皱摺、切片厚度一般为3～4μm。 切片在56 ～ 60℃恒温箱中烤片3－4小时可防止脱片。但注意烤片的温度不宜过高， 高温烤片对抗原有破坏作用。